分子印迹磁性微球在生物样品分析中的应用

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分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP)具有构效预定性、特异识别性、良好的化学稳定性等特点,在固相萃取、色谱分离、膜分离等方面得到日益广泛的应用。分子印迹磁性微球结合了分子印迹技术和磁分离技术的优点,具有特异性吸附能力,形状均匀可控,在外加磁场下实现磁分离,简化样品前处理的操作。本文建立了真空微波辅助萃取/吲哚乙酸MIP磁性微球富集-高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)方法在植物生长素分离分析中的应用,并初步研究了植物外源激素溶液浸种和清水浸种后豌豆、水稻种子萌芽过程中生长素的含量变化。制备了莱克多巴胺MIP磁性微球,研究其结构性质和萃取性能,并应用于猪肉和猪肝加标样品的分离富集。本文主要研究内容如下:   (1)概述了分子印迹聚合物微球的合成和表征方法,其中重点介绍了分子印迹磁性微球的研究进展。概述了分子印迹聚合物在生物样品前处理中的应用。   (2)建立了真空微波辅助萃取/吲哚乙酸MIP磁性微球富集-HPLC测定豌豆和水稻中吲哚乙酸和吲哚丁酸2种植物生长素的分离分析方法。研究表明,与室温浸提法、-20。℃过夜浸提法比较,真空微波辅助萃取具有更好的提取效果,并缩短了提取时间。吲哚乙酸MIP磁性微球能有效消除基体干扰,选择性萃取和富集豌豆和水稻中的生长素。吲哚乙酸和吲哚丁酸的检出限分别为1.9μg/L和6.8μg/L,加标回收率分别为74.1%-85.6%和69.6%-83.2%。采用该方法初步研究了植物外源激素赤霉酸(gibberellic acid,GA3)溶液浸种和清水浸种后豌豆、水稻种子萌芽过程中生长素的含量变化。   (3)采用微波辐射法制备了莱克多巴胺MIP磁性微球,研究其结构性能和萃取性能,并应用于猪肉和猪肝加标样品中β-兴奋剂的分离富集。采用扫描电子显微镜、红外吸收光谱、热重分析方法、磁学性质测量和激光粒度分析表征莱克多巴胺MIP磁性微球的表观形貌和结构特征。莱克多巴胺MIP磁性微球呈均匀球形,表面疏松多孔,粒径主要分布在80-100μm,具有良好的热稳定性和超顺磁性。采用Freundlich方程拟合实验所得吸附等温线数据,结果表明莱克多巴胺MIP磁性微球识别位点具有非均一性。对比其他结构类似物和对照物,莱克多巴胺MIP磁性微球对模板分子有较高的结合百分率,表明了其对模板分子的特异性识别作用。建立了莱克多巴胺MIP磁性微球富集-HPLC方法测定3种β-兴奋剂的分离分析方法,方法的检出限为0.5-1.0μg/L。该方法应用于猪肉和猪肝加标样品中的3种β-兴奋剂的分析,回收率分别为82.0%-89.6%和80.4%-86.8%,RSD为在6%以内,满足复杂基体样品中痕量β-兴奋剂分析的要求。
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