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鮸鱼[Miichthys miiuy]为近海暖温水性中下层肉食性鱼类,是浙江沿海深水网箱养殖的重要养殖鱼类之一。然而,随着养殖密度的增加,水体环境的恶化,各种细菌性疾病、寄生虫病、病毒性疾病时有发生。Wap65蛋白是一种硬骨鱼类体内的类血红素结合蛋白,参与多个生理生化过程,是一种多功能蛋白,与温度适应、病原感染、重金属污染等多种外界环境应激相关。为了研究鮸鱼Wap65-2基因分子特征及其与细菌感染的相关性,本研究首先从鮸鱼肝cDNA文库中获得了Wap65-2基因的编码序列,并通过5′RACE获得其全长cDNA序列。鮸鱼Wap65-2基因cDNA序列全长1613个核苷酸,包含一个大的开放阅读框,推测编码一个由447个氨基酸组成的分子量为50.7kDa的蛋白。氨基酸序列比较表明,鮸鱼Wap65-2与斜带石斑鱼Wap65-2最相似,氨基酸序列同源性为70.4%。系统进化分析发现,鮸鱼Wap65-2基因与其它Wap65-2亚型基因形成一簇。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,哈维氏弧菌感染后,鮸鱼肝中Wap65-2基因mRNA的相对表达量显著增加(P<0.05),揭示Wap65-2可能参与鮸鱼细菌感染导致的急性期反应。此外,本研究构建了Wap65-2基因的原核表达重组质粒pET22b-Wap65-2,转化大肠杆菌BL21 pLys E菌株并经IPTG诱导后,获得了与预期大小一致的目的蛋白。目的蛋白切胶后免疫小鼠,获得鮸鱼Wap65-2多克隆抗体,Western blot检测能与目的蛋白起强的特异性反应。