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本研究通过析因试验设计,考察温度影响下氨氮对克氏原螯虾免疫指标的影响。主要得出如下结果:1.温度升高或降低,血氨含量将升高,总蛋白含量逐渐降低;氨氮浓度为0、25 mg/L时,温度升高或降低均会使血蓝蛋白含量降低;氨氮浓度为50 mg/L时,血蓝蛋白含量与温度正相关。血氨含量、血蓝蛋白含量与氨氮浓度正相关;15、25℃时,随氨氮浓度升高总蛋白含量先升后降;35℃时,逐渐上升。并建立了温度、氨氮对血氨、血蓝蛋白、总蛋白含量影响的实际二次多项回归方程,分别为:HA=365.78-19.65 T-0.55 A+3.51×10-2T×A+0.36 T2+1.00×10-2A2 HC=-0.12+1.74×10-2T+1.28×10-3A+6.64×10-6T×A-3.28×10-4T2-1.96×10-5A2 TP=-6.24+1.97 T-2.67×10-2A+4.14×10-3T×A-4.12×10-2T2-1.21×10-3A22.无氨氮刺激时,随温度升高,ATP含量逐渐降低;氨氮刺激条件下,温度升高或降低,ATP含量均会升高。温度升高或降低,鳃组织中的SDH活性均升高。随氨氮浓度的升高,ATP含量呈现出先降低后升高的趋势。15℃时,随氨氮浓度升高,SDH活性呈现出逐渐降低的趋势;25℃时,先升高后降低;35℃时,逐渐升高。氨氮刺激改变了克氏原螯虾的能量代谢方式。并建立了二阶多项回归方程,分别为:ATP=1639.09-84.28 T-22.25 A+0.40 T×A+1.30 T2+0.21 A2 SDH=66.19-3.91 T-0.20 A+1.44×10-2T×A+6.25×10-2T2-4.08×10-3A23.随氨氮浓度升高,MDA含量呈先升后降的趋势,PCO含量呈先降后升的趋势。氨氮浓度为0、25 mg/L时,温度升高或降低,鳃组织中的MDA含量均会升高;氨氮浓度为50 mg/L时,随温度升高,鳃组织中的MDA含量逐渐升高。氨氮浓度为0 mg/L时,随温度升高PCO含量先升后降;氨氮浓度为25 mg/L时,先降低后升高;氨氮浓度为50 mg/L时,逐渐降低。温度、氨氮对克氏原螯虾鳃组织中脂质及蛋白质造成的损伤存在相反的效果,温度对脂质的损伤效应较高,对蛋白质的损伤程度较低;氨氮对蛋白质的损伤程度较高,对脂质的损伤程度较低。建立了温度、氨氮对MDA、PCO含量影响的二次多项回归方程,分别为:MDA=1.79-5.24×10-2T+2.10×10-3A+1.27×10-4T×A+1.12×10-3T2-8.68×10-5A2 PCO=0.69+2.68×10-2T-6.21×10-3A-3.08×10-4T×A-4.37×10-4T2+4.7×10-4A24.温度升高或降低,鳃组织中的ACP、AKP活性均会升高,T-SOD活性降低。15℃时,随氨氮浓度升高,ACP、AKP活性均逐渐升高;25℃时,ACP活性逐渐升高,AKP活性先升后降;35℃时,ACP活性先升后降,AKP活性逐渐降低。随水环境中的氨氮浓度升高,鳃组织中T-SOD活性逐渐下降。T-SOD及AKP活性受温度、氨氮胁迫的抑制。分别建立温度、氨氮对ACP、AKP、T-SOD活性影响的二次多项回归方程:ACP=292.72-20.30 T+4.59 A-9.55×10-2T×A+0.45 T2-2.76×10-2A2AKP=92.36-6.82 T+0.58 A-2.59 T×A+0.15 T2-1.08×10-3A2 T-SOD=56.98+9.48 T+0.15 A-2.10×10-2T×A-0.19 T2-5.37×10-3A25.随氨氮浓度升高,pro PO基因的表达量呈现出先降低后升高的趋势。温度升高或降低,pro PO基因的表达量均会升高。氨氮浓度为0、50 mg/L时,随温度升高,SPI基因的表达呈现出先降低后升高的趋势;氨氮浓度为25 mg/L时,随温度升高,SPI基因的表达量呈现出逐渐降低的趋势。15、35℃时,随氨氮浓度升高,SPI基因的表达呈现出先降低后升高的趋势;25℃时,随氨氮浓度升高,SPI基因的表达逐渐升高。pro PO及SPI基因的表达表现出较高的同步性。建立了温度、氨氮对pro PO、SPI基因表达的二次多项回归方程,分别为:pro PO=5.75-0.30 T-7.24×10-2A+1.33×10-3T×A+5.52×10-3T2+1.23×10-3A2SPI=13.02-0.74 T-0.15 A+7.28×10-4T×A+1.20×10-2T2+3.71×10-3A26.15℃时,HSP70/90基因的表达量与氨氮浓度呈负相关;25、35℃时,HSP70/90基因的表达量随氨氮升高,先降后升。氨氮浓度为0 mg/L时,HSP70/90基因的表达量,随温度升高,先升后降;氨氮浓度为25、50 mg/L时,随温度升高,表达量均逐渐上升。HSP70基因与HSP90基因在鳃组织中的表达量呈现出极高的同步性。分别建立温度、氨氮对HSP70、HSP90基因表达影响的二次多项回归方程:HSP70=-0.10+7.36×10-2T-4.47×10-2A+5.86×10-4T×A-1.58×10-3T2+5.2×10-4A2 HSP90=-5.66×10-2+7.13×10-2T-4.57×10-2A+5.19×10-4T×A-1.47×10-3T2+5.48×10-4A2综上所述,温度及氨氮浓度升高,克氏原螯虾血淋巴中的HA含量升高;随温度升高HC、TP含量降低,但随着氨氮浓度升高HC和TP含量逐渐升高。克氏原螯虾鳃组织在氨氮胁迫条件下,对能量的需求增多,以应对氨氮胁迫;高浓度的氨氮胁迫使抗氧化酶活性降低,对ROS的清除速率降低,ROS积累,对细胞造成氧化损伤;温度对脂质的损伤程度更大,氨氮对蛋白质的损伤效应更大;温度及氨氮胁迫可激活免疫相关基因的表达。因此,高温期,克氏原螯虾养殖池塘应勤换水,并做好水草管理,以降低温度、降低池塘中的氨氮浓度,保持良好的水体环境,本研究将有助于克氏原螯虾的健康、高效养殖。