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五叶山小桔属于芸香科。在中国和印度传统医药中,五叶山小桔被广泛用于治疗发烧、感冒、麻木和其他疾病。现代临床研究表明,五叶山小桔有保肝活性。但是,其活性的有效成分尚不清楚。Glycoborinine(GB)是从五叶山小桔中分离出来的主要生物碱之一,属于咔唑生物碱。之前的研究发现:GB具有光敏抗菌和抗癌活性。但是,其抗癌活性的机制并不清楚。 本次研究的目的是探索GB抗癌的细胞信号途径。以HepG2作为细胞模型,通过MTT实验、Hochest33258染色实验、PI染色实验和Annexin V-FITC和PI染色实验分析GB对HepG2细胞的存活率、细胞形态学、核染色质形态学、sub-G1和凋亡的影响。通过研究GB对HepG2的ROS水平和线粒体膜电位的影响,以及对Bax、Bcl-2、细胞质细胞色素C、caspase-3和PARP表达量的影响等,证实GB通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。 MTT实验显示,GB抑制HepG2细胞增殖。在48 h,GB诱导细胞死亡50%的抑制浓度为39.7μM。 Hochest33258的染色实验表明,GB处理组细胞染色质发生凝聚。PI染色实验结果表明,GB处理诱导HepG2细胞形成凋亡峰(sub-G1)。Annexin V-FITC和PI的染色结果表明,GB可以诱导HepG2凋亡。 进一步研究显示,GB处理可诱导HepG2细胞的ROS水平增高。同时,GB处理可诱导 HepG2线粒体膜电位下降。免疫印迹研究结果显示,GB可诱导 HepG2细胞中Bax/Bcl-2的表达比例增加、细胞色素C释放、cleaved caspase-3/procaspase-3的比率和cleaved PARP/PARP比率增加。因此,GB通过线粒体途径诱导HepG2细胞发生凋亡。该研究为GB治疗癌症提供了理论基础。