【摘 要】
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成纤维细胞生长因子受体1（Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1）是一种跨膜蛋白质,在与其配体FGFs结合后,可激活PLCγ,MAPK和PI3K-AKT等信号传导途径,并在细胞增殖、分化、存活和迁移过程中发挥重要作用。卵巢颗粒细胞的过度凋亡可能诱导卵泡闭锁,阻碍卵泡发育。研究发现FGFR1和p65参与调控卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡,影响卵泡的生长发育。本研
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成纤维细胞生长因子受体1（Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1）是一种跨膜蛋白质,在与其配体FGFs结合后,可激活PLCγ,MAPK和PI3K-AKT等信号传导途径,并在细胞增殖、分化、存活和迁移过程中发挥重要作用。卵巢颗粒细胞的过度凋亡可能诱导卵泡闭锁,阻碍卵泡发育。研究发现FGFR1和p65参与调控卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡,影响卵泡的生长发育。本研究前期发现,FGFR1启动子上存在六个p65结合位点,所以推测p65可能通过调控FGFR1的转录表达,进而影响卵泡发育。为探究FGFR1和p65基因在猪卵巢卵泡发育过程中的功能,本研究通过q RTPCR方法检测初情期启动前猪未成熟卵巢组织和初情期时猪成熟卵巢组织,以及大小卵泡颗粒细胞中FGFR1和p65 m RNA的表达量;构建FGFR1和p65真核表达载体和si RNA,研究FGFR1和p65对颗粒细胞增殖、凋亡及雌激素分泌的影响;构建缺失p65结合位点的FGFR1启动子报告基因重组载体,检测FGFR1启动子活性变化。本研究的主要结果如下:（1）成熟卵巢组织和大卵泡（≥5 mm）颗粒细胞中FGFR1/p65 m RNA表达量显著高于未成熟卵巢组织和小卵泡（≤3 mm）颗粒细胞。（2）通过EdU法、ELISA法和Annexin V-FITC/PI双染法检测,发现FGFR1基因促进颗粒细胞增殖和分泌雌激素,抑制颗粒细胞凋亡。（3）FGFR1启动子区-1673/-1663、-1283/1273、-1056/-1046、-746/-736、-534/-524、-348/-338存在转录因子p65潜在结合位点,通过双荧光活性检测和Ch IP实验发现,转录因子p65结合于-348/-338区域正向调控FGFR1基因的转录。（4）通过EdU法、ELISA法和Annexin V-FITC/PI双染法检测发现转录因子p65促进颗粒细胞增殖和分泌雌激素,抑制颗粒细胞凋亡。结论:转录因子p65可能结合于FGFR1启动子区-348/-338位点正向调控FGFR1的表达,促进颗粒细胞增殖和分泌雌激素、抑制颗粒细胞的凋亡。
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