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背景与目的：近年来随着干细胞认识的深入及生物实验技术的进步,干细胞研究已几乎涉及到所有的生命科学和生物医药学等领域。胚胎干细胞更是由于其广阔的应用前景而倍受科学界的关注。阶段特异性胚胎抗原(stage specific embryonic antigen, SSEA)因为其在胚胎干细胞的分离、鉴定中的普遍应用也引起人们的广泛关注。由于在最初发现时,SSEA是特异性地表达于哺乳动物胚胎发育的特定阶段而得名。目前,这些抗原都是通过相应的单克隆抗体作为探针鉴别发现的,并且按照它们被发现的先后顺序将其依次命名为SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4。SSEA-1也称为LeX或CD15,由于它在动物组织中分布的广泛性引起了科学界较多的关注,因此目前对这一抗原的研究相对来说比较多。我们知道胚胎细胞和肿瘤细胞的分裂速度比成熟组织要快很多,且当正常组织发生癌变时,经常伴随着胚胎抗原的出现,这是否也同SSEA等表面抗原的表达有关,现在还仍是疑问。在SSEA-3或SSEA-4的基础上转岩藻糖基化、唾液酸化就可形成LeX或SLeX,但是SSEA-3和SSEA-4除在动物胚胎组织中的研究外,目前在成体组织及肿瘤组织中国内对它们的研究甚少,在乳腺组织中的研究更是几乎空白。进行这方面的研究有助于我们了解胚胎抗原与肿瘤发生发展的关系,并且进一步深化我们对肿瘤的发生机制的认识。已有研究表明SSEA-1在部分恶性肿瘤中有表达,并且其甚至与某些恶性肿瘤的浸润、转移等行为有一定的相关性。在胚胎发育过程中首先出现的是SSEA-3和SSEA-4,后才出现SSEA-1。到底SSEA-3和SSEA-4是否也同LeX或SLeX一样参与某些恶性肿瘤的发生、发展过程,以及其是通过什么样的方式参与该过程尚有待于研究。就国内SSEA-3,4在乳腺癌中的研究报道尚少的现状,本研究主要从乳腺组织及细胞系两个层面采用免疫组织／细胞化染色法对SSEA-3及SSEA-4在乳腺正常组织、乳腺良性病变组织、乳腺癌组织及乳腺癌细胞系MDA-MB468中的表达分布情况进行研究。旨在探讨其与乳腺癌发生的相关性,借此给乳腺癌的基础研究及临床治疗提供一定的参考。材料与方法：1.材料：组织标本与细胞系1.1组织标本：50例乳腺癌,50例乳腺良性病变及20例乳腺正常组织标本均来自郑州大学第一附属医院2006年8月至2007年4月手术标本。并经两位资深病理学家复查确诊。1.2细胞系：人乳腺癌细胞系MDA-MB468采用10%特级新生小牛血清-DMEM培养基(GIBCO/BRL、高糖),0.02% EDTA和0.25%胰蛋白酶的1：1混合液消化,传代,在37℃、5% CO2饱和湿度条件下进行贴壁培养。实验均选用对数生长期细胞(长满80%)。2.方法2.1组织标本切片后采用免疫组织化学SP法检测SSEA-3和SSEA-4抗原的表达情况。2.2选四代对数生长期的细胞做细胞爬片；用4%多聚甲醛置于4度冰箱中固定30分钟；采用免疫细胞化学染色法检测SSEA-3和SSEA-4的表达情况(SP法同上)2.3评分方法：阳性标记强度特征,依照细胞阳性着色程度(抗原含量)可分为以下四个等级：阴性；弱阳性(+)…1分；中等阳性(++)…2分；强阳性(+++)…3分；阳性分布范围,依照阳性细胞数可分以下四个等级：阴性；弱阳性(+)阳性细胞数在25%以下…1分；中等阳性(++)细胞数在25%-49%…2分；强阳性(+++)阳性细胞数在50%以上…3分。采用积分综合计量公式计算以上两评分的乘积<3者为阴性,>4者为阳性,>6者为强阳性,观察5个高倍镜视野(HP.)取其平均。2.4统计学处理：所有数据均采用统计软件SPSS13.0处理,统计方法采用X2检验。当P<0.05时,认为有统计学差异。结果：1.SSEA-3及SSEA-4在乳腺癌细胞系MDA-MB468中的表达结果SSEA-3及SSEA-4两个抗原均可见有较高的阳性表达率,平均>90%。2SSEA-3在组织切片中的表达结果2.1SSEA-3在乳腺癌、乳腺良性病变标本中均有阳性表达。2.2SSEA-3在乳腺癌、乳腺良性病变标本中的阳性表达率分别为34%(17／50)、16%(8／50),且其在ER+乳腺癌标本中的表达阳性率较高(P<0.05)。2.3SSEA-3在乳腺正常组织中检测不到阳性表达结果。.3SSEA-4在组织切片中的表达结果3.1SSEA-4在乳腺癌、乳腺良性病变标本中均有阳性表达。3.2SSEA-4在乳腺癌、乳腺良性病变标本中的阳性表达率分别为58%(29／50)、36%(18／50),其在乳腺癌中的表达与标本ER无明显相关性(P>0.05)。3.3SSEA-4在乳腺正常组织标本中未见阳性表达。结论：SSEA-3及SSEA-4抗原在乳腺癌及乳腺良性病变组织中均有表达,且其表达分布特点具有明显的区别：SSEA-3和SSEA-4在乳腺癌中的表达较之在乳腺良性病变中的表达阳性率均要高(P<0.05),而在正常乳腺组织中这两个抗原均未见有阳性表达。因此,推测这两个抗原可能与乳腺癌的发生有相关性,在乳腺癌组织中其表达会相应的增多,这给我们对乳腺癌的研究提供了新的方向,并且提示我们对这类抗原与乳腺癌发生、发展及预后等的具体相关关系进行研究是有必要的。另外,SSEA-3和SSEA-4在乳腺癌中可见有阳性表达,阳性率分别为34%(17/50)和58%(29/50),且其在乳腺癌细胞系中表达阳性率也较高,而在正常乳腺组织中未见阳性表达。考虑到其在乳腺癌及其正常组织有限的表达分布,可以推测这类抗原可能作为一种潜在的碳水化合物为基础的乳腺癌疫苗的候选抗原,为改善乳腺癌的治疗和预后提供新的希望。我们的实验还发现SSEA-3在乳腺癌中的表达与其ER有正向相关关系,而SSEA-4的表达无此特性。已有研究表明在胚胎发育时期SSEA-3及SSEA-4的表达是不断下调的,并且SSEA-3的下调要快于SSEA-4。这也许就是我们实验发现SSEA-4在乳腺良恶性病变中的表达阳性率均要高于SSEA-3的原因所在,另外也可能提示SSEA-4与乳腺癌病变的关系更值得我们关注。