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目的本研究应用实时荧光定量PCR法检测mi R-200c在膀胱癌细胞株中的表达情况,并且通过上调或下调mi R-200c在膀胱癌T24细胞中的表达来探索mi R-200c对膀胱癌细胞株侵袭迁移能力的影响及mi R-200c与Zebl构成的双向负反馈调节通路对膀胱癌上皮间质转化、侵袭迁移能力的调节作用。方法1.选取膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1、膀胱癌细胞T24、5637,通过RT-PCR检测各细胞系内mi R-200c的表达情况。2.对膀胱癌细胞系T24进行RT-PCR及Western blot检测ZEBl基因的表达,同时划痕试验、Transwell法检测T24细胞的侵袭迁移能力,验证ZEB1与肿瘤细胞侵袭及迁移能力的关系;3.利用脂质体Lipofectamin 2000将人工合成的mi R-200c过表达质粒及mi R-200c抑制剂转染至膀胱癌T24细胞中,观察ZEB1基因表达水平的变化及其对上皮间质转化和肿瘤细胞侵袭及迁移能力的调控。4.构建稳定过表达ZEB1的T24细胞株,观察ZEB1过表达后mi R-200c表达水平的变化及T24细胞侵袭迁移能力和上皮间质转化的变化。结果1.与膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞T24、5637中mi R-200c呈低表达;与分化较好、级别较低的膀胱癌细胞5637相比,T24细胞内mi R-200c的表达水平约为其1/4。2.mi R-200c过表达质粒转然组与对照组相比,前者细胞表达ZEB1的水平明显降低,且肿瘤细胞的侵袭迁移能力受到明显抑制,E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调,细胞发生间质上皮转化;mi R-200c抑制剂转染组与对照组相比,前者ZEB1的表达水平明显增加,且肿瘤细胞的侵袭迁移能力增强,E-cadherin表达降低,Vimentin表达增加,细胞发生上皮间质转化。3.与对照组相比,过表达ZEB1的T24细胞mi R-200c的表达水平下降,细胞侵袭迁移能力增强,E-cadherin表达下调,Vimentin表达增加,细胞发生上皮间质转化。结论1.mi R-200c在高级别、低分化的膀胱癌细胞中呈低表达,提示mi R-200c可作为肿瘤抑制因子。2.mi R-200c可抑制膀胱癌细胞的侵袭转移能力,mi R-200c在膀胱癌细胞侵袭转移过程中发挥重要作用。3.mi R-200c与ZEB1形成了的双向抑制的负反馈环路,对膀胱癌的侵袭迁移能力和上皮间质转化起重要的调控作用。