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目的： 研究四物汤水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响，并通过考察四物汤及其配伍在基因水平对外排转运体P-糖蛋白、MRP2和BCRP的影响，探讨了四物汤的配伍规律；建立Caco-2单层细胞模型，考察了四物汤效应成分梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪在体外的吸收特性。 方法： 1.Caco-2细胞采用MEM培养基进行常规培养，待细胞生长80％时，用倒置显微镜观察细胞形态，建立正确的Caco-2细胞培养方法。用MTS法考察四物汤及其配伍药对水煎液和四物汤效应成分（梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪）对Caco-2细胞的毒性，选择细胞相对存活率大于90%的受试药液浓度作为最大安全浓度，进行后续细胞实验。 2.用流式细胞仪技术测定Caco-2细胞内的荧光强度，考察四物汤水煎液对P-糖蛋白介导底物Rhodamin-123的外排作用，从而判断四物汤水煎液对P-糖蛋白功能的影响。 3.四物汤水煎液与细胞作用24、48、72 h小时后采用Q-PCR技术分析四物汤水煎液对Caco-2细胞上MDR1基因mRNA表达水平的影响；用Western blot技术分析四物汤水煎液与细胞作用48h后对Caco-2细胞上P-糖蛋白表达影响。 4.四物汤及其配伍药对水煎液与细胞作用48 h小时后采用Q-PCR技术分析四物汤及其配伍药对水煎液对Caco-2细胞上MDR1、MRP2和BCRP基因mRNA表达水平的影响。 5.首先建立UPLC-TOF-MS测定四物汤效应成分梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪的方法。再建立Caco-2单层细胞模型，研究四物汤效应成分梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪的双向跨膜转运，用UPLC-TOF-MS测定样品的浓度，并计算表观渗透系数（Papp）和外排比（Er）。 结果： 1.在常规细胞培养条件下，Caco-2生长旺盛，且细胞呈不规则鹅卵石形贴壁生长。MTS结果显示四物汤及其配伍药对Caco-2细胞的最大安全浓度为相当于含生药浓度10 mg/ml，四物汤效应成分梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪在12.5-400 mol/L浓度内对Caco-2细胞基本上没有毒性影响。因此确定四物汤及其配伍药对系列浓度为3.3-10 mg/ml，四物汤效应成分系列浓度为100-400 mol/L。 2.四物汤水煎液3.3、5.0、10.0 mg/ml作用于Caco-2细胞1 h后，对胞内Rhodamin-123的荧光强度没有影响；三个不同浓度的四物汤水煎液作用于Caco-2细胞48 h后，细胞内Rhodamin-123的荧光强度分别减弱了16.6%、22.1%（P<0.05）、45.4%(P<0.01)，具有统计学意义，表明四物汤水煎液对Caco-2细胞P-gp具有诱导作用。 3.在mRNA水平上：四物汤水煎液与Caco-2细胞作用24、48、72 h后对P-gp mRNA具有不同程度的上调作用，表明四物汤水煎液在mRNA水平对P-gp具有诱导作用，其中在给药48 h实验结果较为稳定，且不同浓度的四物汤水煎液都有统计学意义。在蛋白水平上：四物汤水煎液与Caco-2细胞作用48 h后，四物汤水煎液组荧光强度明显高于空白对照组（P＜0.05），即四物汤水煎液能显著降低Caco-2细胞上P-糖蛋白的表达。 4.熟地水煎液组对转运体MDR1、MRP2和BCRP具有诱导作用；当归水煎液对MRP2具有抑制作用，对MDR1和BCRP具有诱导作用；白芍水煎液对MDR1没有明显的作用，对MRP2和BCRP具有诱导作用；川芎水煎液对转运体MDR1、MRP2和BCRP具有一定的诱导作用；各单药与熟地两两配伍后，与四物汤水煎液对比，熟地+当归（君臣药对）对MDR1具有较强的上调作用，对MRP2具有下调作用，熟地+白芍（君佐药对）对MDR1具有下调的作用，对MRP2具有上调作用，四物汤水煎液对MRP2的上调作用最弱；三三配伍也出现类似的结果，与四物汤水煎液比较，熟地+当归+川芎（君臣使药对）对MDR1具有上调作用，熟地+白芍+川芎（君佐使药对）对MRP2具有上调作用，而熟地+当归+白芍（君臣佐药对）对MDR1具有下调作用，四物汤水煎液对MRP2的诱导作用最弱。 5.四物汤4种有效成分梓醇、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪双向转运的Papp值分别为10-5、10-5、10-7、10-6数量级，表观渗透率（PDR）分别为2.76-0.84、1.04-1.27、1.31-1.87、1.06-1.09。 结论： 1.四物汤水煎液能上调Caco-2细胞膜上P-gp基因和蛋白表达的水平，增强了Caco-2细胞P-gp的外排功能；四物汤水煎液干预1 h对P-gp的功能影响不是很明显，其长期干预则能上调Caco-2细胞膜上P-gp的表达水平，提示四物汤水煎液对P-gp功能没有瞬时效应的影响。 2.四物汤水煎液对外排转运体具有诱导作用，拆方后，当归加强了四物汤对MDR1的诱导作用，下调了四物汤对MRP2的诱导作用；白芍加强了四物汤对MRP2的诱导作用，而下调了四物汤对MDR1的作用。在中医药理论中，熟地、当归、白芍和川芎分别作为君、臣、佐和使药，我们的研究结果表明，当归和白芍即臣与佐药在复方中扮演相反的角色，从而使四物汤对外排转运体的调节作用处于一个适中的位置。 3.四物汤4种有效成分梓醇和阿魏酸为易吸收物质，芍药苷为难吸收物质、川芎嗪为中等吸收物质，且4种有效成分主要通过被动扩散机制吸收转运。