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目的:本实验使用VX2肿瘤组织块移植于兔胃窦黏膜下制作兔胃窦癌模型,分别用纳米炭和放射性核素示踪兔胃癌前哨淋巴结进行对照研究,目的是为纳米炭用于胃癌的临床研究打下基础。
方法:
1.兔VX2胃癌模型的制作:先将VX2肿瘤细胞株接种于兔后腿外侧的肌肉内传代,制成了荷瘤兔。取荷瘤兔肿瘤组织,剪成1~2 mm3大小组织块用于胃黏膜下种植。日本大耳兔32只,开腹后,切开胃窦前壁浆肌层,将上述肿瘤组织块2枚埋植于黏膜下,浆肌层缝合,关腹。送动物中心喂养。
2.纳米炭示踪兔胃癌前哨淋巴结的对照研究:上述动物喂养3周后再次剖腹,统计建模成功率。在建模成功的动物的胃肿瘤病灶周围四点浆膜下分别注射99mTc-Sc0.1 ml(0.2μCi)和卡纳琳混悬液0.1 ml(5 mg)。最早黑染的淋巴结为纳米炭组前哨淋巴结(SLN);用γ闪烁计数器检测99mTc-Sc示踪的SLN,γ闪烁计数器探测放射线水平高于背景10倍以上的淋巴结判定为核素组SLN,分别记录两种示踪法检测到SLN的例数、SLN数目及分布情况。分别切取纳米炭和/或99mTc-Sc示踪的SLN、胃肿瘤病灶及胃区域非前哨淋巴结(NSLN),福尔马林固定后,制作石蜡切片,HE染色,观察胃肿瘤病理特征和SLN、NSLN转移情况;测定SLN、NSLN的转移率;计算两种示踪法检测SLN的的敏感性、特异性、假阴性率和预测区域淋巴结转移的准确性。
结果:使用VX2组织块移植于兔胃窦黏膜下制作兔胃窦癌模型的建模成功率84.426(27/32);病理学表现:肿瘤位于胃窦前壁,呈溃疡型或肿块型,62.0%(17/27)胃黏膜形成溃疡;33.3%(9/27)侵及浆膜层。病灶直径0.5~2.4 cm不等,平均1.33±0.39 cm。光镜下见肿瘤细胞形态不规则,呈片状、巢状排列,胞浆红染,核大异型深染,核浆比增大,细胞核大小及形态各异,染色浓淡不均,可见核仁及核分裂象。胃肿瘤分期:IB期10例,II期9例,IIIA期3例,IIIB期2例,IV期3例。
纳米炭卡纳琳与放射性核素99nTc-Sc两种示踪剂的SLN检出率分别为85.2%(23/27)、81.5%(22/27),P=0.500;SLN的检测数目分别为36(平均1.33±0.67)、34(平均1.26±0.68),P=0.574;SLN分布情况N1分别占75.0%(27/36)、76.5%(26/34),P=0.554;N2分别占25%(9/36)、23.5%(8/34),P=0.554;SLN的转移率分别为44.4%(16/36)、44.1%(15/34),P=0.584,以上结果两组间均无显著差异。纳米炭卡纳琳与放射性核素99mTc-Sc两种示踪法检测SLN的敏感性分别为91.7%(11/12)、91.7%(11/12),P=0.761;特异性分别为84.7%(11/13)、83.3%(10/12),P=0.672;假阴性率分别为10.0%(1/10)、10.0%(1/10),P=0.763;准确性分别为87.0%(20/23)、86.4%(19/22),P=0.646,以上结果两组间均无显著性差异。两种示踪法检测到SLN的时间:纳米炭法4.06±2.12分钟;核素法28.17±13.48,P<0.01,差异有显著性。SLN与NSLN转移率分别为43.9%(18/41)、16.0%(39/244),P<0.01,差异有显著性。
结论:本实验证实了使用VX2组织块移植于兔胃窦黏膜下制作兔胃窦癌模型的可行性和稳定性,能较满意地模拟胃癌淋巴结的转移规律,是制作大动物胃移植性肿瘤模型的一种良好的方法。
通过纳米炭卡纳琳与放射性核素99mTc-Sc示踪兔胃癌前哨淋巴结的对照研究,表明纳米炭卡纳琳与放射性核素99mTc-Sc两种示踪剂在SLN的检出率、SLN的检测数目与分布情况、SLN的转移情况无显著差异;两种示踪剂检测SLN的敏感性、特异性、假阴性率和预测区域淋巴结转移的准确性无显著差异。证实纳米炭示踪胃癌前哨淋巴结效果与放射性核素99mTc-Sc是一致的,由于其显影快而持久、无放射性、使用方便等优点,可替代放射性核素应用于胃癌的临床研究。