亚慢性阿维菌素中毒致王鸽神经细胞凋亡的研究

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阿维菌素(avermectin, AVM)是一种高效、广谱的农畜两用杀虫剂,具有优良的驱虫效果及安全性,但是随着AVM用量的不断加大,环境中AVM的蓄积量也不断增多,已经对生态系统造成了不良的影响。鸽子及鹌鹑因其对环境中化学物质的变化比较敏感,因此,被认为是监测生态环境的首选生物。本课题以王鸽脑神经组织为研究对象,采用给王鸽饲喂添加不同剂量AVM的日粮(对照组饲喂不含AVM的全价日粮、低剂量组20mg/(kg· diet).中剂量组40mg/(kg· diet).高剂量组60mg/(kg· diet))的染毒方法,复制王鸽亚慢性AVM中毒模型。在染毒后的第30d、60d、90d分别采样,通过对王鸽脑神经系统病理组织学、超微结构、抗氧化功能、DNA损伤、细胞凋亡及bcl-2、α-Syn mRNA表达水平的检测和观察,进而探讨AVM对王鸽脑神经系统细胞凋亡的时间-剂量-效应关系。研究结果如下:1.应用HE染色、透射电镜以及TUNEL法,观察不同剂量AVM在不同时间对王鸽脑神经组织毒性作用,从形态学角度验证了AVM能够引发神经细胞凋亡,其细胞凋亡率与AVM作用程度呈正相关。2.通过对抗氧化相关指标以及蛋白质羰基含量情况的检测,证实AVM能引起神经细胞氧化损伤,结果表明,AVM致谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性下降,超氧化物歧化酶(SOD)活性降低,丙二醛(MDA)含量增加及蛋白质羰基含量增加,且呈剂量-效应关系,说明AVM造成王鸽脑神经组织发生氧化损伤,影响其正常的生理机能,进一步诱导细胞凋亡的发生。3.应用KCl-SDS沉淀法检测DNA-蛋白质交联率,结果表明,AVM能够引起王鸽脑神经组织DNA-蛋白质交联率升高,且呈剂量-效应关系,说明AVM可损伤王鸽脑神经组织的DNA, DNA损伤可以进一步诱导细胞凋亡的发生。4.应用荧光实时定量PCR法检测细胞内α-Syn、bcl-2mRNA表达水平,结果显示AVM能够引起王鸽脑神经组织内α-Syn mRNA表达水平增加,凋亡的标志性基因bcl-2mRNA表达水平减少,综合研究表明,α-Syn.bcl-2基因在AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡中发挥重要作用。本试验从细胞形态、氧化应激、DNA损伤、细胞凋亡等检测指标入手,阐述了AVM对神经系统细胞凋亡的研究机制,为进一步研究AVM对生物的影响提供数据资料,并为保护生态环境和促进畜牧业发展提供了科学参考。
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