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前言 糖尿病(DM)已发展成为全球性的健康问题，根据国际糖尿病联盟(IDF)统计，2000年全球DM患者为1.51亿，而目前已达2.85亿，按照目前的速度增长，估计到2030年全球将有近5亿人患有DM。DM因其严重影响人类的健康而引起世界范围内学者的关注。目前的研究表明，白介素1B(IL1B)基因家族的遗传变异与血糖稳态及2型糖尿病(T2DM)的发展有关。本文利用提取基因组DNA及MassARRAY分子量阵列技术对辽宁地区汉族健康人群及T2DM人群IL1Brs16944进行基因多态性分析，以探讨IL1Brs16944基因多态性与T2DM的关系。 研究方法 一、研究对象的选择及入选标准 （一）病例组的选择 选取中国医科大学附属第四医院内分泌科2012年10月至2013年6月住院的T2DM患者583人，均为汉族，其中男290人，女293人，年龄（58±21）岁，病史在1-20年之间，符合1999年WHO糖尿病专家委员会提出的诊断及分型标准，同时根据既往病史、家族史及实验室检查，排除同时合并有垂体瘤、原发性甲状腺功能亢进症等内分泌系统疾病，或患有各种内科急、重症，或进行过胃空肠吻合术等易引起血糖变化等手术的患者。 （二）对照组的选择 以2012年10月至2013年6月本院体检者正常汉族对象366人为对照组，其中男179人，女187人，年龄（56±19）岁，两组对象年龄、男女比例无显著性差异（P＞0.05），除外DM及心、肝、肾等疾患。以上试验对象均无血缘关系。 二、实验方法 两组对象于晨空腹留取依他酸抗凝血2毫升，同时记录其年龄、性别、身高、体重、血压等基本临床指标，在OlympusAU2700全自动分析仪上酶法测定血糖、总胆固醇、甘油三酯，直接法测定低密度脂蛋白、高密度脂蛋白，在TOSOH全自动分析仪上液相层析法测定糖化血红蛋白，在Elecsys2010全自动分析仪上电化学发光法测定胰岛素及C肽水平，以上检验结果均选用高、中、低3种质控样品进行质控分析。 提取留取血样DNA，试剂盒为宝生物工程（大连）有限公司生产的TaKaRa9450，并用紫外分光光度法对提取的DNA进行浓度及纯度测定，其浓度和纯度应达到要求（(DNA浓度＞10ng/μl，纯度OD260/280为1.6～2.0)。 MassARRAY分子量阵列技术进行基因分型，送上海医药临床研究中心检定。 三、统计学处理 运用基因计数法计算各组基因频率和等位基因频率，然后用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验确认研究样本的群体代表性。用SPSS19.0软件包进行分析，组间计量指标比较采用t检验，组间基因频率比较采用卡方检验，样本群体代表性采用吻合度检验法计算两组X2值。对照组及病例组不同基因型间临床参数比较采用单因素方差分析。 研究结果 一、两组对象一般资料比较 病例组体质量指数(BMI)显著高于对照组(P＜0.05)，说明T2DM患者的肥胖较明显。病例组收缩压、舒张压均较对照组增高(P＜0.05)，说明T2DM患者更易患有高血压病（见表1）。 表1，两组对象一般资料比较（(x)±s）┏━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━┳━━━━━┓┃分组┃例数┃BMI(kg/m2)┃SBP(mmHg)┃DBP┃(mmHg)┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃病例组┃583┃25.72±3.85┃135.78±18.19┃83.2┃1±10.63┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃对照组┃366┃23.94±3.41┃126.72±15.16┃76.7┃1±11.07┃┗━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━┻━━━━━┛ 二、两组对象IL1Brs16944基因多态性检测结果 IL1Brs16944基因共发现AA、AG、GG三种基因型，基因分型以AG杂合子分布最多，纯合子AA及GG其基因频率分布接近，两组对象各基因型分布无显著性差异(X2=0.025，P=0.746)，其等位基因分布亦无显著性差异(X2=0.572，P=0.449)（见表2）。根据两组X2值，其自由度为2，P值均＞0.05，显示两组人群基因频率符合遗传平衡法则，具有群体代表性。 表2，两组对象IL1Brs16944基因多态性分布[n/(％)]┏━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃┃┃基因型频率┃┃等位基因频率┃┃分组┃例数┃┃┃┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━━━┫┃┃AA┃AG┃GG┃A┃G┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━┫┃病例组┃583120(20.58％)┃292(50.09％)┃171(29.33％)┃532(45.63％)┃634(54.37％)┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━┫┃对照组┃36682(22.40％)┃183(50.00％)┃101(27.60％)┃347(47.40％)┃385(52.60％)┃┗━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━┛ 三、两组对象各基因型间临床参数水平比较 对照组各基因型间的BMI、空腹血糖、血脂（甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白）无显著性差异(P＞0.05);病例组各基因型间的BMI、血脂（甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白）、各时间段的血糖、胰岛素及C肽水平（0分、60分、120分、180分）、HOMA-IR值、HOMAbeta值、糖化血红蛋白同样无显著性差异（P＞0.05）（见表3-6，各临床参数取95％可信区间）。 表3，病例组各基因型间临床参数比较1（(x)±s）┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┓┃分组┃糖化血红蛋白(％)┃空腹血糖(mmol/L)┃60分血糖(mmol/L)┃120分血糖(mmol/L)┃180分血糖(mmol/L)┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃AA┃8.87±0.54┃11.92±1.65┃18.33±2.16┃18.79±2.23┃15.37±2.76┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃AG┃9.69±1.00┃12.34±0.96┃19.08±1.65┃20.45±2.97┃15.08±1.53┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃GG┃8.76±0.45┃11.81±1.32┃18.48±1.32┃19.31±1.73┃14.78±1.88┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃F┃1.23┃0.24┃0.21┃0.69┃1.60┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┛ 表4，病例组各基因型间临床参数比较2（(x)±s）┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃分组┃甘油三酯(mmol/L)┃低密度脂蛋白(mmol/L)┃高密度脂蛋白(mmol/L)┃总胆固醇(mmol/L)┃BMI(kg/m2)┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AA┃2.36±0.55┃3.12±0.22┃18.33±2.16┃5.19±0.31┃25.88±0.87┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AG┃2.21±0.25┃3.12±0.13┃19.08±1.65┃5.11±0.18┃25.29±0.57┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃GG┃2.37±0.47┃3.23±0.20┃18.48±1.32┃5.25±0.30┃26.02±0.87┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃F┃0.13┃0.52┃0.23┃0.38┃1.26┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━┛ 表5，病例组各基因型间临床参数比较3（(x)±s）┏━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃分组┃胰岛素0分(μU/ml)┃胰岛素60分(μU/ml)┃胰岛素120分(μU/ml)┃胰岛素180分(μU/ml)┃HOMA-IR┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AA┃11.48±5.56┃37.12±15.91┃9.97±18.79┃34.68±21.77┃4.79±0.94┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AG┃11.26±1.96┃30.33±4.09┃33.53±4.71┃23.37±3.63┃4.79±0.72┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃GG┃12.76±3.93┃31.81±5.80┃33.13±5.83┃24.66±6.44┃4.90±1.05┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃F┃0.25┃0.78┃0.62┃1.57┃0.02┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━┛ 表6，病例组各基因型间临床参数比较4（(x)±s）┏━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━┓┃分组┃C肽0分(ng/ml)┃C肽60分(ng/ml)┃C肽120分(ng/ml)┃C肽180分(ng/ml)┃HOMAbeta┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃AA┃2.46±0.28┃4.87±0.73┃6.54±0.95┃5.97±0.75┃42.99±20.82┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃AG┃2.62±0.20┃5.08±0.43┃6.45±0.53┃5.61±0.44┃38.88±10.01┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃GG┃2.56±0.27┃5.17±0.58┃6.59±0.72┃5.47±0.59┃42.24±12.50┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃F┃0.35┃0.20┃0.05┃0.55┃0.12┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━┛ 结论 本实验对辽宁地区汉族人群IL1Brs16944进行基因多态性分析发现，IL1Brs16944基因多态可能与T2DM无关。