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外周血中检测循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)是一种方便、快速、非侵袭性“液体活检”方式,通过监测患者血液中CTCs数量的变化,可实现实时术后评估、复发转移的监测,具有重要的临床意义。本文针对循环肿瘤细胞检测,提出制作了一种基于过滤方式的循环肿瘤细胞筛选微流控芯片。主要完成工作内容如下: 1.针对商用过滤膜存在多孔融合的问题,以及硅、镍等其他材质滤膜存在着工艺复杂,费用高等问题,本文采用创新型“软光刻技术”制作了PDMS通孔滤膜。采用深离子刻蚀方式,在硅材料上制作了包含高深宽比微柱系列的滤膜模具,浇筑PDMS,覆盖以盖板并夹压。通过可溶性牺牲层作为转移层,成功制作了孔径可控,分布均匀的PDMS通孔滤膜。制作过程具有一次制作模具可反复浇筑的特点,兼顾膜精确性及成本问题,并验证了其初步应用。 2.基于PDMS通孔滤膜制作了一种CTC过滤式芯片,并利用人类肺癌细胞株悬浮液对芯片进行孔径、流速参数等优化和稳定性、灵敏度测试,初步检测显示,芯片对于细胞悬浮液在10 mL/h流速下,回收率>93%。 3.临床样本作为检测对象,以免疫磁珠与PDMS滤膜芯片对同一组病人样本进行平行实验对比。实验结果显示,无论从捕获CTC检出率(92.85% vs71.42%)及CTC平均数目(66/样本vs36/样本)方面过滤式芯片均优于免疫磁珠方法。基于PDMS过滤膜的微流控芯片对循环肿瘤细胞有着快速高效的筛选能力,与文献报道CTC检测芯片有着同等捕获效率同时,成本大大降低,为肿瘤临床检测和诊断提供了一个非常实用可靠的工具。