动植物来源内生菌次级代谢产物成分及抗菌活性研究

• 作 者: 汪夕芳
• 机 构: 中山大学
• 出 处: 中山大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 植物内生真菌 红树林 次级代谢产物 抗菌作用 柱前衍生化 新药筛选 天然药物

天然产物研究是新药筛选的热点，但由于植物来源的天然药物生产周期长、产量低等因素不能得到广泛的工业应用。植物内生菌由于参与或部分参与了植物活性成分的合成，具有产生特定植物活性成分的能力，因此植物内生菌次级代谢产物的研究越来越受天然产物化学家的关注。
本文对采白海南尖峰岭蕨类健康植物内生真菌ZSU-H85、南海红树林内生真菌No．2533及动物蝉体内的放线菌N26等三株动植物内生菌及其代谢产物进行了系列研究：
通过建立抗菌筛选模型，对ZSU-H85、No．2533菌株进行抑菌活性检测，结果发现均有较好的活菌抑菌作用。
采用滤纸片双层平板法，对ZSU-H85、No．2533、N26发酵液不同提取部位进行了以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、酿酒酵母、白色念珠菌等敏感菌为指示菌的抗菌活性筛选。结果发现ZSU-H85、No．2533的不同极性部位均有较好的抑菌活性：蕨类内生真菌ZSU-H85的石油醚、乙酸乙酯萃取部位对白色念珠菌、酵母菌及大肠杆菌显示强烈的抑制作用；红树林内生真菌No．2533的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部分均对白色念珠菌、酵母菌有强烈的抑菌作用，对酿酒酵母菌的抑制超过了两性霉素B，抑菌圈均超过20mm；它的氯仿、乙酸乙酯萃取部位还对芽孢杆菌显示强烈的抑菌活性。放线菌N26次级代谢产物部分溶剂萃取部位只有弱的抗菌活性。
本论文对植物内生真菌ZSU-H85、No．2533进行了抑菌活性指导下的次级代谢产物研究。共纯化得到十个单体化合物；利用EI-MS、HREI-MS、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、<'1>H．<'1>H COSY、UV、IR等波谱技术，鉴定了它们的结构；首次发现了两个新的天然产物，一个是来源于ZSU-H85次级代谢产物的新的葸醌类化合物H85-377，另一个是来源于No.2533次级代谢产物的新的含氯异香豆素类化合物Avicennia-C。抑菌实验显示Avicennia-C有较好的体外抗真菌活性。鉴于石油醚萃取部位有较好的抑菌活性，但成分复杂、极性较低，不利于层析分离。本文通过四因素三水平正交实验设计，采用三种衍生化试剂(硫酸二甲酯、三氟化硼-甲醇、碘甲烷)对石油醚萃取部位的GC-MS分析柱前衍生化方法进行了研究，通过薄层扫描测定转化率，筛选、优化并验证出最佳的衍生化条件：以硫酸二甲酯为酯化试剂，无催化剂、超声反应0.5h。利用该方法对上述三内生菌的石油醚萃取部位进行了GC-MS分析，结果表明该法对微生物低极性部位长链脂肪酸的分析较为有利。