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研究目的:研究探讨人体肌动蛋白家族成员Homo sapiens kinesin family member21B(KIF21B)基因在骨肉瘤的增殖及迁移这两个进程当中起到的作用。方法:首先在培养的HOS,Saos-2,U-2 OS三个常用骨肉瘤细胞系中应用实时定量PCR(qPCR)方法检测KIF21B基因的表达丰度ACT以验证其在骨肉瘤中的异常过度表达。随后以KIF21B基因为模板,设计RNA干扰靶点序列,构建目的基因RNA干扰慢病毒载体并包装(shRNA慢病毒)。对体外培养的U-2 OS细胞进行shRNA慢病毒感染达到敲除实验组KIF21B基因的目的,并检测其中目标基因的敲除率(实验中敲除率达到74.9%),检测合格的细胞分入实验组shK][F21B组(正常目的细胞,加入shRNA病毒感染的细胞组)并引入另一组对照组shCtrl组(正常目的细胞,阴性对照病毒感染的细胞组)。将两组细胞培养后分别进行Western blot试验验证靶点的有效性,然后进行Ciligo细胞计数、MTT细胞活力检测、细胞周期分析及细胞凋亡检测,比较两组实验结果以探究KIF21B基因在骨肉瘤细胞增殖中的作用。同时对合格的两组细胞分别进行划痕试验、侵入试验及Transwell试验,将两组实验结果进行比较,检验KIF21B基因对骨肉瘤细胞迁移的影响。结果:三种体外培养骨肉瘤细胞HOS,Saos-2,U-2 OS中检测到 KIF21B 基因表达丰度依次为 15.30±0.098,12.17±0.147,12.47±0.058,明显高于正常细胞表达,表达丰度为中。Western blot试验证明靶点对目的基因的内源表达有敲减作用,因而是有效靶点。培养5天后Ciligo细胞计数结果为与对照组shCtrl组(4.01±0.12)相比,实验组shKIF21B组(1.11±0.08)细胞增殖抑制明显(P<0.05)。MTT细胞活力检测结果表明:相比shCtr组(4.045±0.3489),shKIF21B 组(0.877±0.0367)细胞增殖减缓(P<0.05)。细胞凋亡检测表明相比对照组,shKIF21B组处于S期的细胞减少(P<0.05),处于G2/M期的细胞无显著变化,处于G1期的细胞增多(P<0.05),即实验组细胞DNA合成明显减少。细胞凋亡率检测结果shCtrl组为4.53±0.2514;shKIF21B组为17.66±0.6064,相比对照组,shKIF21B组凋亡数增多(P<0.05)。划痕试验结果提示经shRNA慢病毒感染24小时后,对照组迁移面积18.17%±1.20%,实验组为4.68%±0.82%,(P<0.05)。实验组U-2 OS细胞的迁移能力受到显著抑制。同时侵入试验和Transwell试验结果同样揭示了经shRNA慢病毒感染,实验组U-2 OS细胞的侵袭能力受到显著抑制。结论:KIF21B基因的表达在骨肉瘤的增殖和转移过程中起到重要调节作用,在骨肉瘤的基因研究及未来可能的靶向治疗中有一定研究前景。