人脐带华通胶间充质干细胞对白细胞介素1β诱导大鼠髓核细胞凋亡的保护作用及机制研究

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目的:  研究人脐带华通胶间充质干细胞(hWJCs)对白细胞介素1β诱导大鼠髓核细胞(NPCs)凋亡的保护作用及相关机制。  方法:  在体外进行hWJCs和NPCs的原代培养,传至第3代用流式细胞仪对hWJCs进行细胞表面标志物鉴定,测定hWJCs的CD29、CD44、CD34、CD45及HLA-DR位点。将第3代髓核细胞分成3组:(1)对照组(A组)单独培养NPCs,不予IL-1β刺激且不与hWJCs共培养;(2)IL-1β干预组(B组)用10ng/ml的IL-1β干预24小时,然后更换为完全培养基再培养24小时;(3)共培养组(C组)用10ng/m的IL-1β干预24小时,再更换为完全培养基与hWJCs非接触共培养24小时;用Annexin V/PI染色后使用流式细胞仪测定3组髓核细胞(NPCs)凋亡率;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组NPCs的ADAMTs-4(金属蛋白酶-4),MMPs-3(基质金属蛋白酶-3),TIMP-1(基质金属蛋白酶抑制剂-1)的表达情况;用caspase试剂盒分别检测各组髓核细胞(NPCs)的caspase-3、caspase-8和caspase-9相对表达活性。  结果:  根据流式细胞仪检测的结果证实培养的第三代hWJCs超过99%的CD29和CD44阳性,小于3%的CD34、CD45、HLA-DR阳性,hWJCs细胞纯度良好。应用流式细胞仪所测得的B、C组髓核细胞(NPCs)的凋亡率均比A组高(p<0.05), C组凋亡率又比B组低(p<0.05)。用RT-PCR所测3组髓核细胞ADAMTs-4、MMPs-3、TIMP-1的相对表达量,B、C组的ADAMTs-4、MMPs-3表达量均比A组高(p<0.05);C组ADAMTs-4、MMPs-3的表达量比B组低(p<0.05)。B、C组TIMP-1的表达量比A组低(p<0.05);B组TIMP-1的表达量又比C组低(p<0.05)。caspase-3、caspase-8、caspase-9的相对活性显示B、C组均比A组高(p<0.05),C组的比B组低(p<0.05)。  结论:  人脐带华通胶间充质干细胞对IL-1β诱导的NPCs退变凋亡有明显的保护作用,可能与hWJCs分泌的一些细胞因子抑制了髓核细胞凋亡(NPCs)的线粒体途径和死亡受体途径有关系。
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