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SR蛋白激酶(Serine/arginine Protein Kinases，SRPKs)是一类使SR蛋白特异磷酸化的激酶。SRPKs家族成员通过磷酸化SR 蛋白，影响SR蛋白对pre-mRNA剪接位点的识别，调控剪接复合体的组装，调节SR蛋白在细胞内的定位。
目前，关于SR 蛋白激酶的研究主要集中在高等真核生物上，在低等真核生物中的报道还比较少，尚未见到有关多头绒泡菌SR 蛋白激酶及其功能的研究。本课题组在前期研究中，从多头绒泡菌筛选到一个SR 蛋白激酶类似蛋白的cDNA序列，由于该基因编码的蛋白与其它物种的 SR 蛋白激酶高度同源，因此将其命名为PSRPK(Physarum SR protein kinase)。本文以人SR蛋白ASF/SF2为底物，对PSRPK的磷酸化性质进行了研究，得到的结果如下：
一、多头绒泡菌PSRPK能够磷酸化ASF/SF2。Pull-down检测结果表明重组PSRPK能够在体外与重组人SR蛋白ASF/SF2相互作用，酵母双杂交检测结果也表明PSRPK和ASF/SF2能够在酵母细胞内相互作用，说明PSRPK在体外和体内都能与ASF/SF2形成复合体。将PSRPK基因和ASF/SF2基因分别重组到两个相容的表达质粒pET-28a(+)和pQE-30上，并将重组质粒转化到同一大肠杆菌BL21内进行表达。Western blot检测结果表明，共表达ASF/SF2与单表达ASF/SF2在分子量上有差别，前者比后者的分子量大，说明共表达菌内的ASF/SF2被PSRPK修饰。将共表达ASF/SF2用碱性磷酸酶处理后再经Westem blot检测，发现处理后ASF/SF2的分子量与单表达ASF/SFl2的相同，说明共表达菌内ASF/SF2的化学修饰是PSRPK的磷酸化作用引起，即PSRPK能够在大肠杆菌内磷酸化共表达的ASF/SF2。以放射性[γ-<32>P]AT0P和ASF/SF2为底物，用放射性自显影技术检测了PSRPK的体外磷酸化作用，发现PSRPK能将放射性[γ-<32>P]ATP的γ磷酸根基团转移到ASF/SF2上，说明重组PSRPK具有在体外磷酸化重组ASF/SF2的功能。
二、PSRPK两个保守结构域的存在是其磷酸化ASF/SF2的前提。通过氨基酸序列比对发现，PSRPK像其它SRPK 家族成员一样存在两个保守的结构域，两个保守结构域之间由一段非保守的肽段连接，N-端保守结构域前是一段非保守的酸性肽段。为探究各结构域在PSRPK磷酸化作用中扮演的角色，我们构建了含不同结构域的PSRPK残缺肽，并通过放射性自显影技术检测了含不同结构域的：PSRPK残缺肽对ASF/SF2的体外磷酸化作用。结果显示：保留两个保守结构域但缺失了N-端28个氨基酸的PSRPK残缺肽具有与完整PSRPK相同的磷酸化功能，而只含有两个保守结构域之一的PSRPK残缺肽不能催化ASF/SF2磷酸化。这个结果说明，两个保守结构域对PSRPK磷酸化功能的发挥是必不可少的。通过PSRPK与经典蛋白激酶氨基酸序列的比对发现PSRPK含有经典蛋白激酶的十二个功能亚域，而且这些功能亚域恰好分布在PSRPK的保守结构域1和保守结构域2上。我们推测PSRPK的保守结构域1可能具有与ATP结合的功能，保守结构域2可能具有与多肽底物结合并催化磷酸根基团转移的功能。
三、ASF/SF2的RS结构域是发生磷酸化的主要区段。为了探究PSRPK 磷酸化作用的底物的结构特点，我们构建了含有RS结构域而不含RRM结构域的 ASF/SF2残缺肽RS和含有RRM结构域但不含RS结构域的ASF/SF2残缺肽△SR，并通过放射性自显影技术检测了PSRPK对这两个 ASF/SF2残缺肽的体外磷酸化作用。结果显示：重组PSRPK能够磷酸化ASF/SF2残缺肽RS，不能磷酸化ASF/SF2残缺肽△SR；PSRPK磷酸化残缺肽RS的程度与其磷酸化ASF/SF2的程度相似。这些结果说明：ASF/SF2被磷酸化的区段主要位于RS结构域。