石斑鱼TRIM39基因的分子克隆及功能分析

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石斑鱼是我国南方沿海各省以及东南亚各国名贵的海水养殖鱼类之一,经济价值极高。近年来,随着高密度、集约化养殖,石斑鱼的病害频发严重制约了石斑鱼的健康养殖。其中石斑鱼虹彩病毒和神经坏死病病毒是重要的病毒性病原。尽管目前已经相继分离鉴定出多株虹彩病毒和神经坏死病病毒,但对于石斑鱼如何抵御这些病毒入侵的免疫防御机制仍了解甚少。三重基序蛋白TRIM(Tripartitemotif protein),是一个结构保守、进化快速的蛋白家族。对哺乳动物TRIM39基因研究发现,它在细胞周期调控中发挥着重要作用。鉴于前期研究发现新加坡石斑鱼虹彩病毒SGIV(Singapore grouper iridovirus)感染石斑鱼脾细胞之后,引起细胞周期的改变,并最终诱导一种新的程序性细胞死亡-类凋亡,是否石斑鱼TRIM39基因(EcTRIM39)参与SGIV感染及其诱导的细胞周期改变尚不知晓。本研究克隆得到石斑鱼TRIM39基因全长,生物信息分析表明EcTRIM39基因与双色雀鲷(bicolor damselfish)所编码的TRIM39具有70%左右的同源性且含有典型的RING结构域、SPRY结构域和PRY结构域。EcTRIM39在肠、皮肤、脾中表达量较高。亚细胞定位结果显示,EcTRIM39主要在细胞质中成点状分布。体外过表达EcTRIM39导致G1期细胞增多,S期细胞减少,表明EcTRIM39能影响细胞周期,即使细胞阻滞在G1期,而且缺失RING结构域影响EcTRIM39的定位和细胞周期。进一步研究表明,体外过表达EcTRIM39不仅能够抑制SGIV和石斑鱼神经坏死病毒RGNNV(red-spotted grouper nervous necrosis virus)的感染复制,且能抑制病毒诱导的NF-κB启动子激活。此外,过表达EcTRIM39能够抑制SGIV感染FHM细胞诱导的细胞凋亡,而该基因抑制细胞凋亡的功能不依赖于RING结构域。根据上述结果我们推测石斑鱼TRIM39在SGIV感染过程中可能通过调节细胞周期改变和细胞凋亡来调控病毒复制。总之,以上研究将对我们理解SGIV病毒免疫逃逸-宿主免疫调节的相互作用提供重要理论信息。
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