西兰花再生体系的建立及遗传转化体系初探的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:syh904
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芥子油苷(glucosinolates)是一类含氮、含硫的植物次生代谢产物,主要分布于十字花科植物中。芥子油苷及其代谢产物具有广泛的生物学效应。近年来,芥子油苷在参与植物的防御反应和抗癌等方面引起了极为广泛的关注。当芥子油苷在黑芥子酶的作用下,会水解生成一系列活性物质,这些活性物质在植物防御昆虫、草食动物及病原菌的侵袭过程中起重要作用;某些脂肪族芥子油苷的水解产物表现出很强的抗癌活性,其中4-甲基亚磺酰丁基芥子油苷即萝卜硫素的水解产物是迄今为止植物中发现的抗癌活性最强的化学成分。提高植物中萝卜硫素的含量,培育具有抗癌活性的功能蔬菜,是一个值得深入研究的问题。近10年来,大量的国内外研究证实经常食用某些十字花科的蔬菜,如西兰花、花椰菜、萝卜、白菜等可降低人们罹患多种不同肿瘤疾病的风险,存在于这些植物中的具有抗癌活性的物质就是萝卜硫素,萝卜硫素的前体物质是由FMOGS-OX1基因催化生成的。在常见的十字花科蔬菜中,西兰花中萝卜硫素的前体物质含量远远地超过了其它蔬菜,尤其在幼嫩组织中的含量更高,若能通过基因工程手段过量表达FMOGS-OX1基因,则有望获得具高抗癌活性的西蓝花,为癌症的治疗起到有益的辅助作用。本研究以西兰花下胚轴为外植体,讨论了影响西兰花再生体系的诸多因素,建立了西兰花再生体系,结果表明:不同的基因型对外植体的不定芽分化率有很大的影响。本实验中珠绿、青秀的不定芽分化率分别为92.5%和91.1%,都要高于其它三个品种;苗龄对外植体的分化也有一定的影响,实验中比较了珠绿和青秀在不同苗龄下的不定芽分化率,表明珠绿与青秀都是6d时的分化率最高,分别为94.1%和92.1%;激素是影响不定芽分化的重要因素,本实验中添加3mg/L6-BA和0.2mg/LIAA时,珠绿和青秀的不定芽分化率都是最高,分别为95.2%和94.6%;在培养基中添加AgNO3会显著提高不定芽分化率,当添加4mg/LAgNO3时,珠绿和青秀的不定芽的分化率最高,分别为97.6%和95.2%;在生根培养基中添加0.2mg/L IBA时,生根效果最好,珠绿和青秀的不定根分化率分别为87.5%和82.6%。构建了植物表达载体35S:FMOGS-OX1。并且还初步探索了西兰花的遗传转化体系,最适合珠绿的卡那霉素筛选压力为7mg/L,最适合青秀的卡那霉素筛选压力为8mg/L;同时确定了侵染时间,外植体的最适侵染时间为3-5min;200mg/L羧苄青霉素便可以完全的抑制农杆菌的生长,不定芽的分化率最高。
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