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第一部分:双向电泳结合MALDI-TOF/TOFMS分析高血压进程中自发性高血压大鼠肾脏蛋白表达动态变化
目的:肾脏是高血压重要的靶器官之一,高血压进程中往往伴随着不同程度的肾损伤,本实验研究自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR)与对应周龄正常Wistar-Kyoto大鼠(Wistar-Kyoto rat,WKY)肾脏差异表达蛋白,建立二者清晰且分离度高、重复性良好的2DE图谱,通过分别对比两种大鼠随年龄增长肾脏蛋白的动态表达变化,发现高血压肾损伤发生发展过程中的相关蛋白,探索高血压及继发性肾损伤的发病机制。
方法:18、24、32周龄SHR与WKY各6只分别处理,颈动脉插管测量大鼠血压,肾脏组织蛋白提取、纯化后做双向电泳分析,图谱经PDQuest软件分析后得到的差异蛋白点用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOFMS)分析鉴定。
结果:SHR与WKY比较,共有12个蛋白点表达发生变化,有6个蛋白点下调,4个蛋白点上调,2个蛋白点消失。经MALDI-TOF/TOFMS分析鉴定,分别是铜锌超氧化物歧化酶、NADH脱氢酶[辅酶]黄素蛋白2、过氧化物酶2、谷胱甘肽硫转移酶ω-1、H+ATP运输合酶、3-羟基蒽醌3,4双加氧酶、ATP合酶亚基α蛋白、α-B晶状体、3-磷酸甘油醛脱氢酶、V型质子ATP酶亚基E1、肝再生相关蛋白LRRG07蛋白和二氢蝶啶还原酶。这些蛋白参与到氧化应激、细胞凋亡、生物蝶呤代谢及能量代谢等方面,提示这些过程可能参与了高血压及继发性肾损伤的发生及发展进程。其中铜锌超氧化物歧化酶、H+ATP运输合酶及3-磷酸甘油醛脱氢酶在不同周龄大鼠中呈现规律性变化,有助于对高血压及继发性肾损伤发展进程加深了解。
结论:氧化应激、细胞凋亡、生物蝶呤代谢障碍以及能量代谢障碍在高血压及继发性肾损伤进程中发挥着重要的作用,相关蛋白的发现为治疗高血压及肾损伤提供了新的治疗着眼点。
第二部分:半夏白术天麻汤对自发性高血压大鼠肾脏蛋白的调节作用
目的:半夏白术天麻汤是临床上治疗高血压的经典复方之一,疗效明确,能够改善高血压左心室肥厚,但其对肾脏的调节作用尚无研究。本实验通过研究半夏白术天麻汤干预后的自发性高血压大鼠肾脏蛋白表达情况,以揭示半夏白术天麻汤治疗高血压肾损伤的蛋白质组学机制,为进一步阐明中药复方半夏白术天麻汤的作用机理提供依据。
方法:6周龄自发性高血压大鼠随机分为两组,SHR组与半夏白术天麻汤组,半夏白术天麻汤组以半夏白术天麻汤水煎剂灌胃至24周龄,SHR组和血压正常的WKY组灌服等量的蒸馏水,三组大鼠(n=6)于24周龄处理,进行肾脏组织双向电泳分析,具体方法同第一部分。
结果:半夏白术天麻汤可调节肾脏铜锌超氧化物歧化酶、过氧化物酶2、3-磷酸甘油醛脱氢酶及α-B晶状体的蛋白表达,这些蛋白靶点与氧化应激及细胞凋亡密切相关,提示半夏白术天麻汤可通过抗氧化应激及防止细胞凋亡来发挥治疗作用。
结论:半夏白术天麻汤可通过抗氧化应激及防止细胞凋亡来发挥治疗作用,靶蛋白的发现为揭示中药复方半夏白术天麻汤的作用机制提供了理论依据。上述结果尚待western blot进一步验证。