【摘 要】
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丝氨酸蛋白酶调控生物体内多种生理反应,具有重要的生理功能,其短肽抑制剂的研制和开发是一个研究热点,具有重要的临床应用价值.该论文以胰凝乳蛋白酶为模型,利用新兴的噬菌
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丝氨酸蛋白酶调控生物体内多种生理反应,具有重要的生理功能,其短肽抑制剂的研制和开发是一个研究热点,具有重要的临床应用价值.该论文以胰凝乳蛋白酶为模型,利用新兴的噬菌体肽库技术,进行筛选蛋白酶抑制剂的研究.针对蛋白水解酶的特点和筛选抑制剂的目的性,将亲和筛选和蛋白酶的水解活力相结合,改进了传统的亲和筛选方法,筛选富集到的噬菌体中,抑制性噬菌体克隆占80%,高于以往的亲和筛选,大大提高了对抑制剂筛选的有效性.通过序列分析,六肽库筛选得到了保守性序列(S/T)RVPR(R/H),十五肽库筛选发现了特征顺序(L/I/V)S、L(R/H)、HS,为进一步的研究提供了线索.根据筛得的保守性六肽序列设计合成的短肽Ac-ASRVPRRG-NH<,2>和Ac-ASRVPRVG-NH<,2>,对酶具有竞争性抑制作用,计算机结构计算也证实了短肽与酶活性中心的相互作用.该文首次利用噬菌体肽库筛选出了胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂,并验证了针对蛋白酶抑制剂所设计的筛选方法是行之有效的.
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