昆明小鼠卵母细胞孤雌激活及去核的研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maowangaa
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
自1998年首例体细胞克隆小鼠成功后,小鼠体细胞核移植技术逐渐成熟,许多品系的小鼠在体细胞核移植上的都取得了成功,得到了克隆后代,但昆白小鼠却一直未见成功的报道。昆白小鼠作为我国一种重要的小鼠品系,具有遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,广泛应用于药理,毒理、微生物学的研究以及药品、生物制品的检定,是国内良好的实验动物模型。 本研究从3个方面对昆白小鼠体细胞核移植进行了研究:小鼠原核期受精卵体外培养液的筛选,不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响和去核方法的研究。 1.体外培养环境显著影响小鼠植前胚胎的发育,许多品系小鼠胚胎明显表现出2-细胞阻滞,包括昆明白小鼠。因此,找到一种稳定的克服2-细胞阻滞的培养体系十分必要。本实验在小鼠输卵管上皮细胞共培养的基础上,比较了小鼠精原核形成期受精卵在CZB、M16、KSOM、mCZB、mM16、mKSOM6种培养液中体外发育的能力。从而获得一种可以有效支持昆明小鼠受精卵体外发育最佳的培养体系,为小鼠核移植重构胚的培养奠定基础。实验结果表明,共培养系统对胚胎早期发育具有明显的促进作用。改良的M16、KSOM培养液可以满足小鼠胚胎早期发育的要求,可获得较高的囊胚率,分别为80.23%、78.82%,可以作为小鼠体细胞核移植重构胚体外培养液。 2.通过7%的乙醇处理6~9min,含2、5、8、10mmol/MLSrCl2加上5μg/MLCB的M16培养液激活处理5小时,含10mmol/mLSrCl2加上5μg/M1CB的M16培养液激活处理3、4、5、6h,先用7%乙醇激活处理7min,再用10mmol/mLSrCl2+5μg/mLCB激活处理5小时等4种方法对卵母细胞激活效果的比较。实验结果表明:乙醇激活获得了较高的激活率(91.76%)和囊胚率(76.47%);较高浓度的SrCl2或充足的处理时间均可以激活小鼠卵母细胞,并使之有发育至囊胚的能力;乙醇的激活效果好于其他激活方式。因此,使用乙醇作为小鼠卵母细胞的激活剂是可行的。 3.为了提高小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,本研究在如下不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01g/mL、0.02g/mL、0.03g/mL的M2-微滴中,在体式显微镜下显核效果已确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含CCB浓度分别为5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:去核时在如下条件下,可以取得最佳去核效率:(1)操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;(2)去核时操作液中细胞松弛素B(cytochalasin-B,CB)浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。实验证明,在含2%的蔗糖,10μg/mL的细胞松弛素的操作液中,昆白小鼠MⅡ期卵母细胞直接去核是可行的。
其他文献
多媒体技术可以利用计算机对文字、图像等进行处理与展示,现已普遍应用于中小学课堂教学中.充分利用多媒体技术不仅可以帮助学生更为直观的进行学习,还可以扩展学生的思维能
英语完形填空是考试中的必考题型,由于完形填空对学生的综合能力考察要求较高,也是学生比较顾虑的考试题型.完形填空主要考察英语的词语搭配、语法搭配、逻辑思路三个方面,是
新课程标准在时代的进步之下,愈发的完善,并且其中的内容也愈发的符合当前的教学实际情况,而在其中对于数学教学也提出全新的教学要求,当前的小学数学教学课堂当中,教师们已
初中英语作为我国素质教育的重要组成部分,在新课程要求下,发挥学生的主体作用,加强学生的能力的培养已成为当下初中英语课程改革的重点.学生作为教学的主体,只有发挥其主体
语文是学生在初中阶段学习的重要学科.同时,语文教学也为提升学生的文化素养奠定了基础.在当前的教学形势下,教师想要提升初中语文课堂教学的有效性和高效性,就应该在实际教
1 FMDV vp1基因的克隆及表达 参照GenBank中的O型FMDV(foor-and-mouth disease virus,FMDV)的vp1基因序列设计了一对特异性引物,用PCR方法扩增得到一969bp的DNA片段,测序后以
盐碱地枸杞栽培技术俞益民枸杞果实甘甜,营养丰富,既是名贵的中药材,又是良好的滋补剂,素有“红宝”之称。在宁夏,盐碱地种植枸杞,见效快,效益高,是开发利用盐碱地的有效途径之一。现
随着新一轮教育改革的推进,对小学数学教学提出了“解决问题”的教学策略,要求教师要重视培养学生解决问题的能力.但在当前小学数学教学中,部分教师受传统教育思想的影响,不
鲁迅小说既有中国古典小说的特征,又吸收了西方小说的写作方式.鲁迅小说的结构出发点在于揭示“国人的灵魂,挖掘社会的病根”.鲁迅在借鉴继承和融合改造的基础上,努力将外部
冷矿筛系列适用于温度150℃以下的冷烧结矿的分级,分为二、三、四次筛机,具有不同的筛孔尺寸。有8×9(m)、2.5×8.5(m)和2.5×7.5(m)三种。2.5×7.5筛机分带移动小车和不带