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目的:检测Livin基因在人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞SKOV-3和耐药细胞SKOV3/CDDP中的表达情况。通过microRNA干扰沉默耐药细胞SKOV3/CDDP细胞株中Livin基因,检测microRNA干扰前后,Livin基因在人卵巢癌耐药细胞中的的表达变化和细胞增殖及凋亡改变。探讨利用Livin基因做靶点,逆转卵巢肿瘤耐药性的理论依据和可行性。方法:1复苏人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞SKOV-3及其耐药细胞SKOV3/CDDP,体外培养两种细胞,并传代,在倒置显微镜下观察两种细胞大体形态。2利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定并比较Livin基因在人卵巢浆液性乳头状囊腺癌亲本细胞及其耐药细胞中的表达水平。3利用脂质体转染法,将设计好的含有靶向Livin基因的microRNA序列的质粒载体,转染进入SKOV3/CDDP细胞,使Livin基因沉默,在荧光显微镜下观察转染效率,采用RT-PCR法测定Livin基因在转染前后SKOV3/CDDP细胞中的表达变化。4应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测利用靶向Livin基因的microRNA干扰对耐药细胞SKOV3/CDDP增殖情况的影响。5应用流式细胞术(FCM)法检测靶向Livin基因的microRNA干扰前后,耐药细胞株SKOV3/CDDP的细胞凋亡情况。结果:1光镜下,人卵巢浆液性乳头状细胞囊腺癌细胞SKOV-3生长良好,培基清亮,细胞光泽度好,生长密集,形态呈长梭形,伪足生长旺盛,折光性好。人卵巢浆液性乳头状囊腺癌耐药细胞SKOV3/CDDP生长良好,培基清亮,细胞密集,形态呈多边形,不规则,光泽度好,折光性好。2通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定, Livin mRNA在人卵巢浆液性乳头状囊腺癌亲本细胞SKOV-3及其耐药细胞SKOV3/CDDP中均有表达。与亲本细胞相比,耐药细胞的条带更亮一些,灰度比值分别为50.88%±1.37, 23.66±0.91%,进行统计学比较,具有显著性差异(P<0.05),表明Livin mRNA在耐药细胞中有高表达,比亲本细胞表达要高。3光镜下,转染48小时后,对照组和非特异性转染组细胞生长密集,光泽度好,特异性转染组细胞密度较前两组低,转染后的SKOV3/CDDP细胞在荧光显微镜下观察,转染的细胞呈绿色荧光,转染率>70%,表明转染有效。4 RT-PCR方法测定,Livin基因在对照组和非特异性转染组和特异性转染组的含量变化,灰度比值测定显示,三组分别为50.47±0.46%, 49.71±0.57%和13.83±0.47%,对照组和非特异性转染组在统计学上无明显差异, (P>0.05),表明转染试剂对细胞中Livin mRNA的表达无明显影响。而特异性转染组与对照组及非特异性对转染组比较均有显著性差异(P<0.05)表明转染后,耐药细胞株SKOV3/CDDP中Livin基因mRNA的表达明显降低。5四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法结果显示:转染24h后在490nm光波下对照组、非特异性转染组和特异性转染组的OD值分别为0.474±0.04, 0.424±0.05, 0.245±0.03,对照组、非特异性转染组无显著性差异,(P>0.05),表明转染试剂对细胞增殖无明显影响。而特异性转染组的OD值明显低于其他两组,与其他两组比较,均有显著性差异(P<0.05),转染48小时后各组的OD值为0.612±0.07,0.634±0.05,0.353±0.05,转染72小时后各组的OD值为0.802±0.07,0.780±0.06,0.410±0.02,各组统计结果显示,对照组和非特异性转染组均无明显差异,而特异性转染组与两者相比,均有显著性差异,(P<0.05)表明转染后,细胞增殖受到明显影响,并且随着时间的延长,对照组和非特异性转染组细胞的增殖明显快于转染组。6流式细胞术(FCW)结果显示:转染48小时,SKOV3/CDDP细胞对照组,非特异性转染组,特异性转染组的凋亡率分别为1.15±0.98, 1.62±0.34, 14.86±0.37。数据显示,特异性转染组的细胞凋亡率较对照组和非特异性转染组高,进行统计学比较,特异性转染组细胞凋亡率和其他两组相比,差异性显著,有统计学意义(P<0.05),表明Livin基因在细胞中含量的减少可以明显促进细胞的凋亡。结论:Livin基因与细胞耐药有密切关系。Livin在人卵巢浆液性乳头状囊腺癌耐药细胞SKOV3/CDDP中的表达比亲本细胞SKOV-3中表达高,利用靶向Livin基因的microRNA干扰,可以在耐药细胞SKOV3/CDDP中沉默Livin基因。减少Livin基因在人卵巢浆液性乳头状囊腺癌耐药细胞中的表达能抑制肿瘤细胞的增殖,可诱导耐药细胞的凋亡。