【摘 要】
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子宫内膜炎是威胁藏绵羊健康的疾病之一,严重阻碍着藏绵羊养殖业的健康发展,其病因是病原微生物感染藏绵羊子宫,所引起的一种繁殖障碍性疾病,导致绵羊消瘦、体重降低,影响绵羊的繁殖性能。由于羊子宫内膜炎不出现全身性的发热、炎症、疼痛等临床症状,特别是隐性子宫内膜炎,易被饲养者忽视,也是藏绵羊淘汰率升高的主要原因,给绵羊养殖业造成严重的经济损失。本研究共采集600份青海牧区的藏绵羊子宫,对样品进行单一PCR
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子宫内膜炎是威胁藏绵羊健康的疾病之一,严重阻碍着藏绵羊养殖业的健康发展,其病因是病原微生物感染藏绵羊子宫,所引起的一种繁殖障碍性疾病,导致绵羊消瘦、体重降低,影响绵羊的繁殖性能。由于羊子宫内膜炎不出现全身性的发热、炎症、疼痛等临床症状,特别是隐性子宫内膜炎,易被饲养者忽视,也是藏绵羊淘汰率升高的主要原因,给绵羊养殖业造成严重的经济损失。本研究共采集600份青海牧区的藏绵羊子宫,对样品进行单一PCR检测并建立了多重PCR方法,随机挑取30份阳性进行病原菌的分离与鉴定试验。取得结果有以下几点:(1)通过培养标准菌株并提取基因组,筛选出特异性引物,建立了单一PCR方法,其特异性良好,灵敏性较高。运用单一PCR法检测的600份样品中,无乳链球菌感染比例占47.33%,大肠杆菌占34.83%,金黄色葡萄球菌占6.5%,大肠杆菌和无乳链球菌混合感染占24.67%,未检出沙门氏菌和化脓隐秘杆菌。(2)通过单一PCR法的反应条件及检测结果,以无乳链球菌cfb基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因为靶基因,标准菌株的基因组为模板,建立了多重PCR法。选取单一PCR检测的阳性样品,运用多重PCR法检测。其结果是无乳链球菌感染比例占45.50%,大肠杆菌占33.50%,金黄色葡萄球菌占6.5%,大肠杆菌和无乳链球菌混合感染占23.67%。多重PCR法检测结果与单一PCR法比较,多重PCR检测出单一感染的无乳链球菌符合率为95.65%,大肠杆菌为95.12%,金黄色葡萄球菌为100%,大肠杆菌和无乳链球菌混合感染的符合率为95.95%等。对三种主要病原菌最低检测浓度分别为金黄色葡萄球菌2.4×10~5 CFU/mL,大肠杆菌1.03×10~5 CFU/mL,无乳链球菌2.8×10~5 CFU/mL。(3)通过对30份样品的进行分离与鉴定,结果分离鉴定出无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和其他菌种,与多重PCR的检测结果基本一致。结果表明,成功建立了多重PCR方法并检测出引起青海藏绵羊子宫内膜炎的主要病原菌为无乳链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
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