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2004年11月以来,我国南方各省主要青蟹养殖区暴发大规模流行病,短时间即引起大批死亡,采用各种手段也无法阻止病情的蔓延,已造成严重损失。本研究以福建省厦门和漳州两地养殖场的患病青蟹为实验对象,系统深入地展开病原生物研究工作,从病原的分离纯化、人工感染、组织病理观察、生理生化指标监测等方面着手,分析病原生物的类型,观察并诊断病原的传播途径、致病原因以及发生发展过程,主要实验结果如下:
1.比较确立了适当的病原生物分离纯化方法,并从病蟹体内分离出1株对称球形病毒,由单层的衣壳及其包裹的电子致密的核心部分组成,其中衣壳直径约60 nm,核心部分直径约40 nm;病毒基因组为双链RNA,分10个节段,电泳图谱为3/4/3带型。
2.通过人工感染试验进一步确立病毒的致病性,结果表明,注射和浸泡方式均能感染健康青蟹,实验条件下,病发死亡时间为7~9 d,死亡率达100%;同时,监测病毒感染对青蟹相关免疫因子的影响,结果表明,血细胞平均密度在试验36 h~72 h间迅速上升并达到最高值,72 h后又急剧下降,PO、SOD和AKP酶活性呈不同程度的下降趋势。
3.以人工感染的病蟹和养殖场采集的病蟹为样品制作石蜡切片和超薄切片进行组织病理检查,结果表明,病毒能侵染除神经组织外的多种组织器官,包括肌肉、鳃、肠、肝胰腺、心脏等,引起包括细胞核在内的多种细胞器坏死的严重病理变化;病毒衣壳外无囊膜包被,不形成包涵体,感染严重的细胞内以致密的晶格状方式排列,结合病毒基因组的特点,该病毒为典型的呼肠孤病毒;并且,在人工感染36 h后即可观察到细胞内病毒的寄生。