RNA干扰UL54基因对Ⅱ型单纯疱疹病毒在小鼠体内复制的影响

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目的:以构建的UL54 shRNA重组表达载体植入BALB/c雌性小鼠生殖器疱疹动物模型体内,观察RNA干扰后的病理学改变和对UL54基因表达的影响。  方法:采用阴道注射栓塞法建立 BALB/c雌性小鼠Ⅱ型生殖器疱疹模型,运用构建的UL54 shRNA重组表达载体与脂质体混合植入小鼠阴道进行治疗,以shRNA空载体作为阴性治疗对照,以重组人干扰素-α2b治疗作为阳性治疗对照。采用HE染色技术观察两治疗组小鼠阴道及子宫组织形态学上的病理学变化,采用实时荧光定量PCR技术检测HSV-2 mRNA的表达水平,确定UL54基因的干扰和重组人干扰素-α2b对Ⅱ型单纯疱疹病毒在BALB/c雌性小鼠生殖器疱疹动物体内复制的影响。  结果:  (1)成功建立BALB/c雌性小鼠生殖器Ⅱ型疱疹模型。小鼠在感染病毒10天后阴道口出现不同程度的局部红肿,15天后阴道口及周围出现水泡样症状;40天后阴道口及周围出现不同程度的坏死及溃烂,阴道粘膜表面出现严重坏死和脱落,形成缺损,粘膜下层有较多的炎症细胞浸润,细胞间隙空泡样改变。  (2)病理学观察显示:经UL54 shRNA质粒和重组人干扰素-α2b治疗感染Ⅱ型生殖器疱疹的小鼠都能有效抑制炎症细胞的浸润,而重组人干扰素-α2b治疗组抑制效率优于UL54 shRNA干扰治疗组。  (3)治疗后的两组小鼠阴道组织的RT-PCR检测结果显示:UL54 shRNA治疗组和干扰素-α2b治疗组对UL54基因抑制效率分别为20.1%和41.06%,与空白对照组相比较具有明显差异;两治疗组相比,重组人干扰素-α2b治疗组优于UL54 shRNA治疗组。表明UL54 shRNA和重组人干扰素-α2b都能一定程度地下调HSV-2的表达。  结论:构建的pGPU6/Neo-UL54重组表达载体能够在一定程度上抑制炎症细胞的浸润,抑制UL54基因在感染HSV-2的BALB/c雌性小鼠体内的表达。
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