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研究目的:本研究通过移植自制异体脱细胞真皮基质(ADM),观察其在体内长期的生物学转归中主要成分胶原纤维的变化,探讨 ADM浸润的巨噬细胞 M0及 M1、M2极化关系,以期揭示 ADM植入体内后的长期组织学转归的规律。 研究方法: 1.取4只雄性 SD大鼠背部全厚皮片,采用高渗盐水--Triton X100联合戊二醛交联法制备出 ADM,并通过扫描电镜、组织染色、细胞毒性检测对其生物学性能进行检测评估。 2.取成年雄性SD大鼠40只于脊柱两侧分别设计形成1.5cm×1.5 cm大小深达脊背深筋膜的皮瓣,将前期制备的合格 ADM植入左侧皮瓣下(实验组),右侧皮瓣断蒂后仅作原位缝合(对照组)。术后第1、2、3、4、8、12、16、20周每组随机处死5只大鼠,取材并行大体观察、常规 HE染色,及 Masson’s染色和天狼星红-苦味酸特殊染色,免疫组织化学染色标记及定量巨噬细胞 M0及M1、M2分型。 研究结果: 1.自制 ADM真皮结构完整,无明显细胞残留,ADM浸提液与正常培养液中的成纤维细胞生长曲线无明显差别。 2.术后大鼠饮食、活动不受影响,均存活至实验结束。1)大体观察,植入 ADM与周围组织贴合良好,未见明显炎症反应,5个月后取出 ADM体积仅见轻度变小;2) HE染色观察:ADM植入2周内以炎性细胞浸润为主,之后炎性细胞逐渐减少,成纤维细胞及新生毛细血管逐渐增多。植入3个月以后 ADM内细胞与正常组织无明显差别;3)苦味酸-天狼星红染色分析各时间段Ⅰ/Ⅲ型胶原比例,各组数值与未植入前相比差异均有统计学意义;4) Masson’ s三色染色提示植入后的 ADM真皮胶原纤维随着时间推移排列逐渐变得规则、致密;5)巨噬细胞免疫组化染色提示巨噬细胞(CD68+)和M1型巨噬细胞(CCR7),M2型巨噬细胞(CD163+)表达于 ADM及其周围间质,统计不同时期 M1/M2的比例,ADM组 M2/M1值显著高于对照组,差异具有统计学意义。 结论: 1.交联型 ADM植入体内后,作为支架材料具有良好的模板引导作用,能引导细胞及新生血管的迁入,随着原有胶原的降解及新生胶原的生成,处于胶原动态平衡,可长期维持稳定的体积,化学交联能延迟降解吸收作用,提示 ADM作为填充性支架材料具有良好的临床应用前景。 2.目前的研究明确提示不含细胞成份的 ADM在组织重建反应中具有促进促炎性 M1巨噬细胞向行使修复重建作用的 M2巨噬细胞极化的作用,相反含细胞成分的组织,即使是自体移植皮肤主要介导的是 M1巨噬细胞极化。