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放线菌是一类具有重要经济价值和广泛应用前途的微生物。本课题从各地采集的214个土样中,分离得到1156株放线菌,以此为基础建立了放线菌次级代谢产物库。并构建了α-淀粉酶/糖苷酶抑制剂高通量筛选模型。利用此模型从放线菌次级代谢产物库中筛选得到了高产α-淀粉酶/糖苷酶抑制剂的放线菌菌株37株,其中包含5株α-糖苷酶抑制剂产生菌,5株α-淀粉酶抑制剂产生菌,27株为α-淀粉酶/糖苷酶混合型抑制剂产生菌。
利用形态观察、培养特征、生理生化鉴定以及16S rRNA序列分析,对5株α-糖苷酶抑制剂产生菌中的PWH852进行了分类鉴定。结果表明,PWH852菌株为链霉菌属中的微红链霉菌。
通过单因素考察、正交实验设计等方法,本课题对α-糖苷酶抑制剂产生菌PWH852菌株的发酵条件进行优化,使PWH852菌株分泌α-糖苷酶抑制剂产量达到50mg/L,比初始培养条件下的产量提高了1倍。此外,本课题建立了利用三级膜系统、阴阳离子交换树脂吸附、真空冻干三步分离法,对发酵液中的α-糖苷酶抑制剂进行了初步的分离纯化。反转肠囊实验表明分离纯化后得到的粗提物对抑制正常小鼠的餐后血糖具有良好的离体生物学活性。
本课题筛选到的放线菌PWH852菌株具有较高的α-糖苷酶抑制剂产量和活性,且产物分离纯化方法简单易行,成本低廉,为进一步大规模发酵生产α-糖苷酶抑制剂奠定了基础。