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水蜜桃不耐贮藏,低温下易发生冷害,可严重降低果实的食用和商业价值。解析桃果采后冷害发生机理进而探索缓解冷害发生的手段,是桃果采后保鲜研究的关键。桃果为典型的呼吸跃变果实,对乙烯极为敏感,乙烯处理可促进其衰老,而1-甲基环丙烯(1-Methylcyclopropene,1-MCP)是一种新型乙烯受体抑制剂,具延缓果实采后成熟衰老,减轻冷害和提高抗病性等诸多作用。本文以新鲜水蜜桃为试材,通过1-MCP和乙烯处理来影响其采后冷害发生,与对照比较,解析低温冷藏下其冷害发生机理和1-MCP的保鲜机理。本文首先对冷害发生前后水蜜桃进行转录组分析,揭示变化显著的代谢途径,并分析该代谢途径的生理变化。主要研究结果如下:(1)桃果冷害发生进程的转录组分析利用高通量测序技术,对桃果冷藏前对照、冷藏后对照、冷藏后1-MCP及乙烯处理材料进行转录组测序,构建桃果响应低温的cDNA文库,获取不同材料在转录水平的差异信息,完成差异表达基因的GO、COG、KEGG、NR、KOG、Pfam和Swiss-Prot七大数据库的功能注释及富集分析。通过转录组分析发现活性氧代谢、细胞壁代谢以及精氨酸和脯氨酸代谢三个生理代谢途径变化剧烈。(2)1-MCP和乙烯处理对桃果冷害发生进程中活性氧代谢的影响桃果冷藏期间MDA含量和相对电导率迅速升高,相关抗氧化酶活受到抑制,维持了高水平的还原型谷胱甘肽(GSH)含量,而抗坏血酸(ASA)的含量降低。1-MCP处理显著(P<0.05)抑制冷藏期间桃果MDA含量和相对电导率的升高,而乙烯处理在冷藏中期也起到了一定的抑制作用;对桃果切片进行过氧化物染色观察,发现1-MCP和乙烯对O2-都有清除作用,且都能有效清除H202,其中1-MCP的效果远优于乙烯。1-MCP处理可显著(P<0.05)提高冷藏期间桃果超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和谷胱甘肽还原酶(GR)等抗氧化酶的活性,乙烯在一定程度上也提高了相关抗氧化酶的活性,但效果不如1-MCP。1-MCP处理通过消耗冷藏桃果大量的GSH而维持了冷藏后期较高水平的ASA,而乙烯处理效果不佳。综上,1-MCP和乙烯均能通过抗氧化酶和ASA-GSH循环系统提高桃果的抗氧化能力,抑制膜脂过氧化,从而提高采后桃果的耐冷性,但乙烯作用的效果较弱,这可能是常温乙烯处理激发果实提高抗氧化性,这种交叉抗性使其在低温贮藏中维持较高的抗氧化能力。(3)1-MCP和乙烯处理对桃果冷害发生进程中细胞壁代谢的影响桃果的果胶、纤维素和半纤维素含量在冷藏期间迅速降低,细胞壁代谢相关的酶活急剧升高,与抗病性相关的酶活受到抑制。1-MCP处理可显著(P<0.05)抑制冷藏期间桃果细胞壁原果胶、纤维素及半纤维素的降解,冷藏21d时其含量分别是对照的1.38、1.37、1.41倍,而乙烯处理促进了细胞壁降解。通过扫描电镜观察发现,1-MCP处理维持了冷藏期间细胞壁结构的完整,而乙烯处理导致了细胞壁结构塌陷与破损。1-MCP处理能显著(P<0.05)抑制冷藏期间桃果多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶酯酶(PME)、纤维素酶(Cx)、β-葡萄糖苷酶活性升高,乙烯处理诱导PG和PME活性升高,但在一定程度上对Cx和β-葡萄糖苷酶起到了抑制作用。1-MCP和乙烯均能提高冷藏期间桃果几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性,提高果实的抗病性,1-MCP对β-1,3-葡聚糖酶的作用更显著,而乙烯更偏向于几丁质酶。综上,1-MCP能通过抑制细胞壁代谢相关酶活性的升高,维持冷藏期间桃果细胞壁结构稳定性,而乙烯提高了部分细胞壁代谢酶的活性,破坏了细胞壁组分的代谢平衡,导致果实质地的异常变化;两种处理均能提高抗病性相关酶活性,提高果实对病原菌侵染的抵抗能力。(4)1-MCP和乙烯处理对桃果冷害发生进程中精氨酸和脯氨酸代谢的影响冷藏抑制桃果中脯氨酸和多胺的合成及其相关合成关键酶活,提高一氧化氮合酶(NOS)的活性,促进一氧化氮(NO)的合成。1-MCP处理可促进桃果冷藏期间脯氨酸的合成,乙烯则抑制了这一进程,14d时1-MCP处理材料脯氨酸含量分别是对照和乙烯组的1.21、1.48倍。1-MCP能提高冷藏期间桃果脯氨酸合成中谷氨酸途径关键酶△-1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性的升高,并抑制脯氨酸脱氢酶(PRODH)活性的升高,而对脯氨酸合成的鸟氨酸途径影响不显著(P>0.05)。1-MCP处理可促进桃果冷藏期间多胺的合成,显著(P<0.05)提高腐胺(Put)、亚精胺(Spd)和精胺(Spm)含量,而与多胺竞争共同底物精氨酸的NO合成受到抑制,乙烯处理则同时抑制了多胺和NO的合成。1-MCP处理提高了冷藏期间精氨酸脱羧酶(ADC)活性,加强了这一途径多胺的合成积累,而对精氨酸酶和鸟氨酸脱羧酶(ODC)活性的提高仅发生在冷藏初期,后期酶活性变化差异不显著(P>0.05),乙烯处理则抑制了 ADC活性,提高了冷藏初期精氨酸酶和ODC的活性。1-MCP和乙烯处理均抑制了贮藏期间NOS活性,且乙烯的抑制效果高于1-MCP。综上,冷藏抑制了桃果游离脯氨酸和多胺的合成,1-MCP处理能促进冷藏期间桃果游离脯氨酸和多胺的积累,提高果实的耐冷性,而乙烯的作用相反。(5)Put处理对桃果冷害发生进程中精氨酸和脯氨酸代谢的影响通过对桃果切片的过氧化物染色观察,可知Put处理可以有效清除H2O2而提高细胞膜稳定性;通过对细胞壁的电镜观察,可知Put处理维持了冷藏桃果细胞壁稳定性。Put处理可促进脯氨酸的合成,提高冷藏桃果脯氨酸合成关键酶P5CS和冷藏初期鸟氨酸转移酶(8-OAT)活性升高,并抑制了 PRODH的活性。Put处理促进了桃果的多胺合成,而抑制了 NO的合成积累,并能提高桃果多胺合成关键酶ADC活性,抑制NO合成关键酶NOS活性,仅在冷藏初期诱导了精氨酸酶和ODC活性的增强,冷藏后期作用不显著(P>0.05)。综上,Put处理能清除冷藏桃果组织中大量的H2O2,维持细胞壁结构的稳定,促进冷藏桃果游离脯氨酸和多胺的大量合成与积累,提高其耐冷性。