论文部分内容阅读
本文对安卡红曲霉9311(Monascus anka 9311)液态发酵产色素及糖化酶的培养条件进行优化,研究了碳源、氮源、装液量、种龄、接种量等因素对色素积累及糖化酶活力的影响。通过正交实验确定了最佳培养条件。研究了光照、温度、pH值对红曲色素稳定性的影响,优化了桔霉素HPLC检测条件,测定了红曲发酵液中桔霉素含量。主要研究结果如下:1安卡红曲霉9311发酵液最大吸收峰为495 nm和425 nm,所产水溶性色素含量比醇溶性色素高。通过单因素以及正交实验,确定安卡红曲霉9311的最佳培养条件为温度32℃,种龄5 d,初始pH值5.75。以产色素最佳水平组合A2B1C2D3(甘油10%,蛋白胨1.5%,接种量6%,装液量85 mL)发酵时,发酵液色价为263.5 U/mL;以产酶最佳水平组合A1B1C3D2(甘油9%,蛋白胨1.5%,接种量7%,装液量75 mL)发酵时,发酵液糖化酶活达到409.6 U/mL;以正交实验(同时以色价和糖化酶活为观测值)的最佳水平组合A2B1C2D2(甘油10%,蛋白胨1.5%,接种量6%,装液量75 mL)发酵时,发酵液色价达260.3 U/mL,糖化酶活为404.0 U/mL。2红曲色素稳定性受光照、温度、pH值等因素的影响。太阳光下照射10 d色素保存率仅为20.8%,室内自然光下10 d色素保存率为86.5%,室温下闭光保存10 d色素保存率为97.0%;温度对红曲色素稳定性影响不大,但随着加热时间的延长,色素稳定性会逐渐降低,40℃、60℃、80℃三个处理温度经过12 h,其保存率分别为95.0%、92.0%、90.7%;红曲色素在pH值5~9之间稳定性较强。3桔霉素高效液相测定的色谱条件为:色谱柱,Shimadzu VP-ODS C18(5μm,150 mm×4.6 mm);流动相,纯甲醇;pH值2.5;荧光检测器,检测波长为λex=331 nm,λem=500 nm;柱温30℃;流速0.8 mL/min;进样量10μL。优化色谱条件下绘制了标准曲线,低浓度标准样品的质量浓度与峰面积的线性关系良好,R2=0.9999,标准桔霉素HPLC的最低检测质量浓度为0.02 mg/L。4高效液相分析发现,安卡红曲霉9311的发酵液中未检出桔霉素。