论文部分内容阅读
本论文以甘肃甘南的新鲜牦牛血为原料,运用单因素分析方法对牦牛血IgG的含量、活性含量、稳定性进行了研究分析,提出了采用α/β-半乳糖苷酶辅助饱和硫酸铵提取Ig G的方法,运用单因素结合响应面的方式优化了该方法提取IgG的工艺参数,提高了Ig G提取含量,并对样品进行了结构分析。研究结果如下:1.α-半乳糖苷酶辅助饱和硫酸铵法提取IgG最佳工艺参数:酶解时间2 h、酶解pH4.4、酶解温度39℃、酶添加量5 m L(467.5 U),在该工艺条件下,IgG的含量最高,可达27.13 mg/mL,比不加酶处理IgG含量(22.35 mg/mL)提高了21.39%(p<0.05)。2.β-半乳糖苷酶辅助饱和硫酸铵法提取IgG的最佳工艺参数:pH 5.5、温度40℃、时间4 h、酶添加量3.1 m L,IgG浓度为27.51 mg/mL,比不加酶处理IgG含量(22.35mg/mL)提高了23.09%(p<0.05)。3.应用ELISA方法检测经过α-半乳糖苷酶处理后样品IgG活性含量为15.92 mg/mL,比不加酶处理IgG活性含量16.07 mg/mL活性下降了0.93%(p>0.05)。β-半乳糖苷酶处理后样品IgG活性含量为15.71 mg/mL,比不加酶处理IgG活性含量16.07 mg/mL活性含量活性下降了2.24%(p>0.05)。4.在过酸过碱以及加热环境下,IgG变得不稳定,酶处理后,IgG的稳定性损失高于不加酶处理,但差异不显著,65℃以上时,IgG的损失率超过10%,pH≤3.0时,Ig G损失率超过20%,pH≥10.0时,IgG损失超过10%。5.蔗糖、甘氨酸、山梨醇对IgG在酸及碱环境下的活性都具有较好的保护作用,随着保护剂浓度的增加,保护效果也增大。6.采用傅里叶红外光谱仪分别分析不加酶样品与加酶样品IgG,发现在某些特定波长处官能团有所差别,并且,α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶分别处理的IgG与没有加酶处理的IgG比较,二级结构发生变化。