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在农业生产中化学农药的大量使用，不但成本高，污染环境，食品的安全性也受到严重影响。生物农药特别是微生物农药具有对人畜安全、选择性高、对生态环境影响小、不易产生抗药性等优点。但是微生物农药不及化学农药作用快，在植物病害的防治中，还不能完全取代化学农药。未来的趋势是采用化学农药与生物农药相结合的综合防治体制，二者最适比例是1:1。 角毛壳菌（CheatomiumcupreumL.M.Ames）是一类可以抑制多种病原微生物生长，具有很好生物防治效果的生物防治菌，但是对化学杀菌剂敏感，无法和化学杀菌剂在植物病害综合防治体系中共同发挥作用。在农业生产上，多菌灵这类苯并咪唑类化学农药应用较为广泛，所以通过对角毛壳菌进行基因工程改造，构建出既对苯并咪唑类杀菌剂抗性稳定，又能显著抑制植物病原真菌的毛壳菌基因工程菌株，具有重要意义。 本文以角毛壳菌为研究对象，采用多因素正交试验优选法，对毛壳菌原生质体的制备和再生条件进行研究。结果表明，将毛壳菌在PD液体培养基中，25℃下170rpm培养36h收集菌体，用pH7.0的DM溶液配制成的含有2％溶壁酶(lywallzyme)，在25℃恒温酶解2h，原生质体制备率最高。获得的原生质体经过纯化，用RA再生培养基培养获得54.22%的再生率。这为毛壳菌的原生质体转化，获得抗苯并咪唑类杀菌剂的毛壳菌工程菌株提供必要条件。 用多菌灵代表苯并咪唑类杀菌剂检测角毛壳菌的敏感水平，结果表明多菌灵对角毛壳菌的有效抑制中浓度EC50为0.309μg/mL，而转基因角毛壳菌株的有效抑制中浓度EC50提高到了22.36μg/mL。 通过溶壁酶酶解角毛壳菌菌丝体成功制备了角毛壳菌原生质体，并采用PEG介导的原生质体转化法成功地把质粒pBT6转入角毛壳菌中。经过再生培养和选择培养，获得角毛壳菌阳性转化子。然后提取阳性转化子的基因组DNA，通过Southern杂交和传代分析表明抗性基因BENr已经整合到角毛壳菌基因组DNA中。