论文部分内容阅读
目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3)对不同人乳腺癌细胞株 MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞Notch1表达及其下游基因NF-κB、Bcl-2表达和细胞增殖、迁移的影响；探讨As2O3对已转染Notch1 siRNA人乳腺癌细胞株SKBR-3细胞Notch1表达及其下游基因NF-κB、Bcl-2表达的影响。 方法：（1）以MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞为研究对象，以不同浓度 As2O3培养24h和终浓度8.0μmol/L培养24h、48h、72h后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测As2O3对细胞增殖的影响。（2）以 MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞为研究对象，以终浓度8.0μmol/L As2O3培养24h后，Transwell检测As2O3对MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞迁移的影响。（3）以6.0、8.0、10.0μmol/L As2O3培养24h后，RT-PCR检测Notch1、NF-κB、Bcl-2 mRNA表达； Western blot检测Notch1、NF-κB、Bcl-2蛋白表达。（4）应用DMRIE-C Reagent将siRNA片断转染各组SKBR-3细胞培养48h后，运用RT-PCR、Western-blot分析比较Notch1及其下游基因NF-κB、Bcl-2在 mRNA和蛋白水平的表达变化。（5）以 SKBR-3细胞为研究对象，转染siRNA片段后继续培养24h、48h、72h后，MTT比色法检测As2O3对细胞增殖的影响。 结果：（1）MTT结果显示As2O3能显著抑制MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞增殖，且呈现浓度、时间依赖关系(P<0.01)；Transwell结果显示 As2O3能明显抑制 MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞的迁移（P<0.01）。(2) RT-PCR及Western blot结果显示As2O3作用MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞后，可使Notch1、NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平随着As2O3浓度的增加而减少，不同浓度As2O3组与对照组差异均有统计学意义（P<0.05~P<0.01）。（3）应用脂质体转染技术成功将 Notch1 siRNA片段转入 SKBR-3细胞中，并检测到 Notch1 mRNA表达水平下降。（4）RT-PCR及Western blot结果显示，转染Notch1 siRNA+As2O3和转染的Notch1 siRNA的SKBR-3细胞与Blank control的SKBR-3细胞相比，Notch1及其下游基因NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P<0.05~ P<0.01）。（5）MTT结果显示As2O3能显著抑制Notch1-siRNA干扰后SKBR-3细胞增殖（P<0.01）。 结论：As2O3能够抑制 MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3细胞Notch1的表达及其下游基因NF-κB、Bcl-2表达及抑制细胞增殖和迁移，初步揭示As2O3可能是通过Notch1信号通路影响人乳腺癌细胞生物学行为，从而为临床砷剂治疗乳腺癌提供理论和实验依据。