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本文对谷胱甘肽高产菌株的选育及培养条件进行了研究。
首先测定了15株不同种属酵母菌的生物量和胞内谷胱甘肽含量,从中挑选出一株谷胱甘肽和生物量较高的菌株。结果显示,菌株Y8为最优菌,谷胱甘肽含量为0.7%,生物量为5.01g/L,因此将其作为下一步实验的出发菌株。
根据其形态特征、生理生化特征对其分类地位进行鉴定,判定其在分类地位上归属于麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa)。
采用紫外线和<60>Co γ射线联合诱变的方法选育谷胱甘肽高产菌株。通过Ym菌悬液的紫外诱变,筛选出突变株Ym21。在液体培养条件下,Ym21比出发菌株生物量提高8%,谷胱甘肽含量提高95.7%0再以此菌株为出发菌株进行<60>Co γ射线辐照诱变。运用推理育种技术,选育出突变株Ym21-19。该菌株遗传学性质稳定,与Ym21相比生物量提高14.1%,谷胱甘肽含量提高39.6%。
在摇瓶中对Ym21-19的发酵培养基和培养条件进行了优化,单因素和正交实验确定各组分最佳浓度为:葡萄糖4%,酵母粉1.0%,硫酸铵1.5%,硫酸镁0.08%,L-半胱氨酸6mmol/L。利用单因素实验确定最佳产谷胱甘肽的发酵条件为:种子液培养到20h后接种,发酵初始pH为6.5,接种量10%,装液量60mL/250mL,28℃培养32h-36h。