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目的高危型人乳头瘤病毒(High risk human papilloma virus,HR-HPV)持续感染是导致宫颈癌发生的必要因素。肿瘤微环境与其发生发展密切相关,然而在宫颈癌组织中浸润的免疫细胞与癌细胞的相互关系研究仍显不足。自然杀伤性细胞(Natural killer,NK)是一类抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节相关的免疫细胞,通过受体识别,启动活化信号、介导对靶细胞的杀伤、分泌细胞因子,如γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)等而发挥生物效应功能。近期国外研究显示:NK细胞分泌的IFN-γ,抑制人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)的感染,该活性的缺失与肿瘤的发生、发展和转归有密切联系;且有研究报道称IFN-γ抑制转录因子E2F-1(E2F transcription factor 1)的表达,其在多种肿瘤中发挥抑癌或促癌的功能,但在宫颈癌中鲜有报道。课题组前期研究发现,宫颈癌组织中IFN-γ的表达较正常宫颈组织明显减少,为明确E2F-1的表达与NK细胞表达IFN-γ是否相关,并参与宫颈癌的发生发展,本研究通过分析不同病理宫颈组织中E2F-1的表达和IFN-γ~+CD56~+NK细胞浸润,并探讨其与宫颈癌临床病理特征的关系,分析宫颈癌组织中E2F-1的表达和IFN-γ~+CD56~+NK细胞的浸润与HPV16感染的相关性,为探明宫颈肿瘤微环境相关分子免疫机制提供临床实验依据。方法选取2014年9月至2016年3月在唐山市工人医院门诊活检或妇产科手术切除的宫颈癌、宫颈癌前病变及宫颈炎标本共计160例,其中对照组47例、CINⅠ组27例、CINⅡ/Ⅲ组患者46例,CSCC组患者40例,所有受试者无术前的化疗、放疗或生物治疗。临床分期采用FIGO(2009年)分期,病理类型及分级按照WHO标准。对ⅠA~ⅡA期患者采用根治性手术治疗,手术方式采用次广泛或广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫术;对部分ⅠB2和ⅡA2~ⅡB期患者进行辅助放疗,同步放化疗等治疗。患者的一般情况信息通过查阅患者电子病例收集。HE染色不同宫颈组别标本,免疫双荧光共定位检测不同病理宫颈组织中IFN-γ和CD56分子的表达,临床分析IFN-γ~+CD56~+表达与临床病理特征的关系。采用免疫组化染色检测E2F-1在不同组别宫颈组织中的表达。分析E2F-1的表达与IFN-γ~+CD56~+NK细胞浸润数的相关性。试剂盒检测宫颈组织中高危型HPV感染类型,采用卡方检验分析IFN-γ~+CD56~+NK细胞、E2F-1基因与HPV 16亚型感染的关系。结果1统计学分析结果表明:对照组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和CSCC组患者的一般情况(年龄、结婚年龄、初潮年龄、月经的周期和经期、怀孕及流产次数、吸烟饮酒情况),差异无统计学意义(P>0.05)。2与对照组比较,宫颈组织中浸润的CD56~+细胞数百分比在CINⅡ/Ⅲ组(3.89±0.77 vs.2.77±0.32,q=6.28,P<0.05)和CSCC组(4.23±0.67 vs.2.77±0.32,q=5.35,P<0.01)中增加;而宫颈组织中浸润的IFN-γ~+CD56~+细胞数百分比在CINⅡ/Ⅲ组(1.73±0.42 vs.2.09±0.48,q=4.84,P<0.05)和CSCC组(1.21±0.18 vs.2.09±0.48,q=10.06,P<0.01)中与对照组比较显著下降。3宫颈癌临床病理参数相关性分析结果表明:宫颈癌组织中CD56~+IFN-γ~+NK细胞浸润与组织学分化(x~2=4.949,P=0.039)、浸润深度(x~2=5.358,P=0.030)、淋巴结转移(x~2=6.253,P=0.016)和FIGO分期有关(x~2=7.376,P=0.009)。4免疫组化结果显示:E2F-1蛋白在对照组无阳性表达,CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和CSCC组中阳性率分别为14.81%(4/27)、52.17%(24/46)和77.50%(31/40),各组间有差异(x~2=7.376,P=0.009)。5 E2F-1的表达与CD56~+IFN-γ细胞浸润数呈负相关,且差异具有统计学意义(r=-0.6442,P<0.01)。6宫颈鳞癌组织中E2F-1蛋白的表达与组织学分化有关(x~2=4.295,P=0.038),差异有统计学意义,而与宫旁浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期无关(P>0.05)。7 HPV16阳性的CINⅠ组浸润的CD56~+IFN-γ百分数较阴性组增多(2.38±0.30 vs.1.90±0.33,t=2.525,P=0.036),HPV16阳性的CINⅡ/Ⅲ组浸润的CD56~+IFN-γ~+浸润细胞百分数较阴性组下降(1.65±0.34 vs.1.88±0.27,t=2.488,P=0.018),HPV16阳性的CSCC组浸润的CD56~+IFN-γ~+NK浸润细胞百分数较阴性组显著下降(1.13±0.10 vs.1.24±0.15,t=2.680,P=0.012)。在宫颈组织中,HPV16阳性的CINⅠ组(1.31±0.26 vs.1.37±0.30,t=0.370,P=0.747)、CINⅡ/Ⅲ组(2.32±1.00 vs.2.60±1.06,t=0.905,P=0.371)、CSCC组(6.45±2.14 vs.6.62±1.06,t=0.295,P=0.772)E2F-1的表达与HPV16阴性组相比,差异无统计学意义。结论1在宫颈癌变中,CD56~+细胞源IFN-γ的表达呈下降趋势,且在宫颈鳞癌中显著减少,而E2F-1的表达呈升高趋势,且在CSCC组中显著增加。2CD56~+IFN-γ与宫颈癌组织学分化、浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期相关。E2F-1与宫颈癌组织学分化有关。3 E2F-1的表达与CD56~+IFN-γ细胞浸润数呈负相关。