【摘 要】
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藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中的一类捕光蛋白复合物,它由藻胆蛋白(phycobiliprotein)和连接蛋白组成。其中,藻胆蛋白是蓝藻中的捕光蛋白,是一类结构相似的色素
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藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中的一类捕光蛋白复合物,它由藻胆蛋白(phycobiliprotein)和连接蛋白组成。其中,藻胆蛋白是蓝藻中的捕光蛋白,是一类结构相似的色素蛋白,由藻胆色素(phycobilin)与其相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键共价结合而成。大多数藻胆色素的正确连接都需要结合位点专一和对色素的构象有选择性的裂合酶来催化完成。本实验室通过同源性分析,发现一种能催化鱼腥藻PCC7120中的-CPC、-PEC中的Cys-155与PCB连接的基因编码为all5339裂合酶基因,命名为藻蓝蛋白裂合酶CpeT。为了研究精氨酸残基对裂合酶CpeT活性的影响,本课题构建了CpeT的66位精氨酸突变体,将其均突变为丙氨酸,为下一步研究作好准备。 本实验室发现由cpeS基因编码的蛋白为催化-CPC、-PEC中的Cys-84与PCB连接的裂合酶。为进一步研究CpeS结构与功能的关系,利用megaprimer PCR方法构建CpeS的169位精氨酸突变体,将其均突变为亮氨酸,并通过体内重组的方式研究了精氨酸氨酸残基突变对CpeS酶活性的影响,结果表明它的活性为野生型的56.8％。 通过体内重组的方法来检测CpeS(R18K)、CpeS(R147Q)、CpeS(R149L)和CpeS(R169L)这4种CpeS精氨酸突变体的体内催化对活性,并与野生型CpeS对比。结果表明突变体CpeS(R149L)的催化活性几乎完全丧失,推测149位精氨酸可能为CpeS的活性位点。
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