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当归补血汤(DBT)为临床常用经典方剂中补益药的代表方,由金元四大家之一的李东垣始载于《内外伤辨惑论》[1],用于治疗血虚发热证。由当归(Angelicasinensis radix)和黄芪(Astragalus mongholicus radix)组成。本课题旨在对原药材进行质量控制,完善复方水煎液质量标准的研究方法,并进行初步促血管新生、改善内皮细胞功能的药效学研究,以便对药效机制进行研究。 在原药材的质量控制方面,我们比较了《欧洲药典》[2]以及《中国药典》中关于当归、黄芪的内容。并且根据《欧洲药典》(8.0版)下植物药黄芪、当归的专论,对后续实验药材以及在巴黎市场上购买到的药材进行鉴定、含量测定等质量研究。结果表明,专论研究方法可行性高、稳定性好,后续实验药材质量完全符合药典标准,巴黎华人街药材质量良莠不齐。 在当归补血汤水煎液的质量研究方面,建立HPLC方法,对复方、提取物以及单味药材进行液相色谱的分析,测定有效成分的含量。结果表明,该方法稳定、可靠、重复性好。用此法测定了复方、提取物以及单味药材中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花素、黄芪甲苷、阿魏酸的成分含量。结果显示复方水煎液的处理方式相较于单味药有利于提高黄芪与当归中阿魏酸、毛蕊异黄酮的溶出,且经典配伍比例(黄芪与当归质量比为5∶1)的综合得分最高。 在促血管新生药效研究方面,采用Fli-1转基因斑马鱼,建立血管内皮生长因子受体抑制剂(VRI)诱导斑马鱼血管损伤模型。结果表明,当归补血汤复方水煎液、有效成分阿魏酸能够促进斑马鱼肠下静脉(SIVs)的增生。在VRI诱导的血管损伤修复模型中,当归补血汤复方、单味药材水煎液均能在一定程度上恢复被损伤的血管,且经典配伍比例的复方水煎液对节间血管的保护效果强于单味药材水煎液;在提取物中,黄芪总皂苷提取物相较于黄芪多糖提取物对血管的修复作用较为明显;而黄芪中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花素等黄酮类成分相较于皂苷类成分黄芪甲苷、当归有机酸类成分阿魏酸,对受损血管的保护能力较强。说明上述成分可能是当归补血汤促进血管新生的有效成分。 在改善血管功能的研究方面,用LPC诱导大鼠的胸主动脉,造成血管内皮功能障碍模型。结果表明,当归补血汤复方和黄芪、当归水煎液对LPC损伤的血管具有显著的改善作用,并随浓度增加效果增强。当归中的阿魏酸、黄芪中的毛蕊异黄酮苷也能显著改善LPC所致的血管损伤,作用稳定且具有浓度依赖性。说明上述成分是当归补血汤改善血管功能的有效成分。 总之,当归补血汤及其成分质量可控,具有促进血管新生,改善血管功能的作用。