论文部分内容阅读
肺癌是当今世界各地最常见的恶性肿瘤之一。2008年5月4日《生命时报》报道了卫生部对我国第三次居民死亡原因抽样调查结果显示:肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤致死原因,30年竟上升了465％!因此深入肺癌发生和转移中作用的分子机制,是肺癌研究领域的一个重要方向。有研究报道,S100A16在许多不同癌组织中表达发生了上调,而通过对癌症病人外周血中循环癌细胞的基因表达分析,发现S100A16发生了上调,因此S100A16可以作为检测循环癌细胞的标志物之一。但对S100A16的生物学功能的研究还甚少。本研究对S100A16在肺癌发生和转移中的作用进行了初步的探讨。
首先我们采采用免疫组化方法检测S100A16蛋白在肺癌组织中的表达情况,结果显示S100A16在大细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌病人组织中高表达,但其高表达与肿瘤的临床分期没有显著相关性。在小细胞肺癌中没有表达。因此S100A16可以作为区分非小细胞肺癌和小细胞肺癌的一个潜在标志物。
为了进一步研究S100A16在非小细胞肺癌中高表达的生物学作用,采用基因转染方法在肺癌细胞NCI-H1299中进行了S100A16过表达,经G418筛选后获得了稳定高表达S100A16的克隆细胞。体外实验结果显示过表达S100A16的肺癌细胞与空载对照细胞相比,体外生长与非锚定生长能力都显著增加,但体外迁移能力没有明显改变。通过裸鼠的体内成瘤实验的研究发现,过表达了S100A16的肺癌细胞在裸鼠体内的成瘤率和转移能力显著提高。上述体内外实验结果提示S100A16对肺癌的生长和转移有促进作用。进一步研究发现,过表达S100A16后,肺癌细胞中p21蛋白表达明显下降,但mRNA表达水平没有显著变化。此外过表达S100A16后,导致了可溶性的RAGE表达升高,而全长RAGE和N段发生剪切的RAGE没有变化。
S100A16既是一个胞浆蛋白,也是一个分泌蛋白。有报道S100家族成员中具有分泌功能的蛋白可通过与其细胞表面的RAGE结合,激活EGF信号通路来发挥促进细胞生长的作用。但关于S100A16是否具有上述功能未见报道。接下来我们构建pET30a(+)/S100A16原核表达在体,在大肠杆菌中表达,经纯化后获得了S100A16蛋白。将纯化的S100A16蛋白外加入无血清培养的NCI-H1299细胞中体外培养48小时,结果发现,S100A16在10ng/ml浓度时可明显促进肺癌细胞生长,而在100μg/ml时则抑制细胞的存活。
综上所述,我们发现S100A16在肺癌的生长和转移中发挥着重要的作用,这种促进作用一方面与下调p21蛋白,促进可溶性RAGE表达密切相关;另一方面与可溶性的S100A16与RAGE受体作用后促进细胞生长有关。深入的机制研究正在进行中。