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从青霉素、链霉素引发抗生素“黄金时期”以来,直到今天人类发现并已临床应用的抗生素药物超过5000多种,而其中70%源于放线菌,尤其是链霉菌占到了2/3,所以链霉菌一直都是生命科学与医学、药学的研究热点。然而面对抗生素“瓶颈时代”的到来,这就需要在原有研究基础上重新开启抗生素研究的新路径、新方法、新思维。 云南丰富多样的自然生态环境为链霉菌等微生物资源提供了生态多样性,在长期的进化与共栖下形成了丰富的微生物菌种资源。这从根本上保证了次生代谢产物化合物的丰富性,为开展相关活性筛选模型构建、医药农药先导化合物发掘研究奠定了良好基础。 基于以上背景,本文选用69株分离自云南程海的链霉菌及40株分离自云南锡尾矿土壤的链霉菌进行次生代谢产物研究。首先对这109株菌株液体发酵(每株3瓶)进行初步筛选,经TLC(薄层层析)点板分析后,筛选获得10株化合条带丰富的菌株。然后对这10株菌进行液体发酵(每株10L)。之后通过正相硅胶、凝胶分段、TLC点板分析,同时对粗提物进行“HPLC-水-甲醇系统”全梯度分析,并采用统计学方法对代谢产物丰富度及极性分布进行科学、直观的分析,选出代谢产物丰富度较好,极性分布适中的菌株AE21985进行放大发酵。最后对该菌株200L放大发酵并进行处理获得粗提物,并在TLC及HPLC化学分析指导下,运用正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱制备等分离纯化技术获得了34个化合物,解析出其中20个化合物化学结构。 从菌株AE21985发酵粗提物中鉴定了20个化合物结构。其中包括1个酮类新化合物:1-(2-羟基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-基)乙酮。另外19个为已知结构化合物,它们分别为:11个环二肽类化合物:3-(4-羟基苄基)-6-(1H-吲哚-3-基甲基)哌嗪-2,5-二酮、(3S,6S)-3-((R)-仲-丁基)-6-甲基哌嗪-2,5-二酮、(3S)-3-苄基哌嗪-2,5-二酮、(3S,6S)-3-(2-甲基丙基)-6-(丙-2-基)哌嗪-2,5-二酮、3-异丁基六吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮、(3S,6S)-3-((R)-仲-丁基)-6-甲基哌嗪-2,5-二酮、(3S,6S)-3-((R)-仲-丁基)-6-甲基哌嗪-2,5-二酮、(3S,7R,9S)-7-羟基-3-异丁基六吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮、3-(1H-吲哚-3-基甲基)-6-(丙-2-基)哌嗪-2,5-二酮、(3S,8aS)-3-(丙-2-基)六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮及(3S,6S)-3-苄基-6-甲基哌嗪-2,5-二酮;5个酰胺类化合物:(2E)-3-苯基丙-2-烯酰胺、3-苯基丙酰胺、2-苯基乙酰胺、苯甲酰胺及3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺。同时,还分离到1个生物碱类物质1H-吲哚-5-甲醛;2个核苷类物质尿苷及胸腺嘧啶。 该工作为进一步开展该环境下放线菌次生代谢产物研究奠定了基础。