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目的：对通过酶消化法获取的兔尺骨皮质骨细胞进行鉴定,探讨其体外生长、增殖能力及理想的作为种子细胞的代数；检测兔皮质骨成骨细胞在自制小牛脱蛋白松质骨、冻干松质骨(XKC-FDB系列同种骨)及可吸收性明胶海绵三种支架上的生长情况,对三种支架材料与兔皮质骨成骨细胞的生物相容性进行评价,并用不同的细胞密度与三种支架材料复合培养,探求合适的细胞接种密度。为骨组织工程的细胞来源、载体材料的选择和进一步动物体内试验提供实验依据。方法与结果：从3月龄新西兰大白兔(雌雄不限)获取尺骨皮质骨,通过酶消化法获取原代细胞,适时传代。每日倒置相差显微镜观察细胞形态及增殖特征；MTT法检测细胞生长和增殖情况,绘制生长曲线；检测第2、3、6、7和8代细胞ALP；行ALP染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色及骨钙素免疫组化染色,对细胞进行鉴定。结果：分离培养出的原代细胞,形态类似成纤维细胞,具有良好的体外增殖能力,细胞倍增时间约为7天,各项染色检测呈强阳性。细胞增殖速度：第1～2天,各代细胞无差别(P>0.05),第3天开始第7、8代细胞落后于第2、3和6代细胞,一直持续到第10天(P<0.05),而第2、3代同第6代细胞及第7代同第8代细胞之间无显著性差异(P>0.05)。ALP检测：第2、3、6代成骨细胞高于第7、8代细胞(P<0.05)。将成骨细胞接种到三种支架材料上,进行体外复合培养,用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长、增殖情况,并进行MTT、细胞上架率、ALP及骨钙素检测。结果：倒置相差显微镜显示三种支架为多孔网状,孔隙互相通连,随培养时间的延长,细胞生长旺盛,增殖迅速。扫描电镜显示复合培养3d时,有较多的细胞粘附并铺展在支架上,培养6d时,细胞完全伸展,呈长梭形；10d时细胞分泌较多的细胞外基质,重叠生长并连接成网状,尤以两种骨性材料组明显。MTT检测显示三种支架材料在实验前期不影响成骨细胞的生长、增殖(P>0.05)；后期(9d、12d)能促进成骨细胞的增殖及分泌,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),而三种支架材料组之间无显著性差异(P>0.05)。细胞上架率：当细胞接种密度为1×106/ml时,可吸收明胶海绵细胞上架率最高,为45.52±3.15%。ALP检测,细胞密度为1×105/ml时各组之间无显著性差异(P>0.05),细胞密度为1×106/ml时三种支架材料组高于对照组(P<0.05),三种支架材料组之间无显著性差异(P>0.05),细胞密度为6×106/ml及1×107/ml时,可吸收明胶海绵组>小牛脱蛋白松质骨组>冻干松质骨组>对照组(P<0.05)；在12d时细胞密度为6×106/ml的各组支架材料ALP>细胞密度为1×107/ml的各组支架材料ALP。骨钙素检测：第14天小牛脱蛋白松质骨组及冻干松质骨组明显高于对照组及可吸收明胶海绵组(P<0.05)；第21天及第28天,小牛脱蛋白松质骨组>冻干松质骨>可吸收明胶海绵组>对照组(P<0.05)。结论：1、兔尺骨皮质骨体外可以培养出成骨细胞,体外培养的成骨细胞具有增殖、分泌功能,其中第2、3、6代细胞增殖和分泌功能强于第7、8代细胞。新西兰大白兔皮质骨成骨细胞理想的作为种子细胞的代数为2-6代细胞。2、三种支架材料与兔皮质骨成骨细胞理想细胞接种密度为1×106/ml～6×106/ml；随细胞接种密度上升细胞上架率在下降,当细胞接种密度为1×106/ml时,可吸收明胶海绵细胞上架率最高,为45.52±3.15%。3、在理想接种密度下,ALP检测,可吸收明胶海绵>小牛脱蛋白松质骨>冻干松质骨>对照组；骨钙素检测,小牛脱蛋白松质骨>冻干松质骨>可吸收明胶海绵>对照组。4、本实验制备的小牛脱蛋白松质骨与兔皮质骨成骨细胞具有良好的生物相容性及骨诱导性,且制备方便,价格低廉,是很好的骨替代材料,把小牛脱蛋白松质骨与兔皮质骨成骨细胞复合构建组织工程骨,进行进一步试验是可行的。