转筋草孕甾烷生物碱及其抗乳腺癌转移活性研究

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转筋草(Pachysandra terminalis Sieb.Zucc),又称顶生富贵草,雪山苓。为黄杨科(Buxaceae)板凳果属(Pachysandra)多年生宿根植物粉蕊黄杨的带根全草,常绿亚灌木。转筋草包含生物碱、甾醇、三萜类、木质素、酚类等成分。其主要成分为富贵草型甾体生物碱。50年前由日本学者菊池彻发表过28个甾体类生物碱化合物以及9个五环三萜类化合物。转筋草主要具有具有抗氧化、抗溃疡、治疗慢性气管炎、抑制胃酸分泌,抑制胆碱酯酶等药理作用。本实验室近年来报道了转筋草抗肿瘤转移生物碱成分,并阐明转筋草生物碱为该民间药物抗肿瘤转移作用的有效部位。本文在此基础上,对转筋草总生物碱有效部位开展系统的化学成分研究。采用硅胶柱色谱、凝胶色谱分离,多种分离模式的制备高效液相色谱纯化,从转筋草的总生物碱提取物中得到了23个单体化合物,其中9个生物碱成分为未见文献报道的新化合物。以一维、二维核磁共振波谱和质谱等有机波谱方法,鉴定了各生物碱成分的化学结构,分别为:转筋草碱K[20α-dimethylamino-16β-hydroxy-3β-(3’α-isopropyl)-lactam-11α-isovaleryl-5α-pregn-1β,4β-diyl acetate(1)],转筋草碱L[20α-dimethylamino-3β-(3′-isopropylidene)lactam-5α-pregn-4-one(2)],转筋草碱M[3β-dimethylamino-20α-senecioylamino-5α-pregn(3)],转筋草碱N[3β-dimethylamino-20α-senecioyl amino-5α-pregn-5-en(4)],转筋草碱O[3β-methylamino-20α-senecioylamino-5α-p regn-5-en(5)],转筋草碱P[3α-methylamino-20α-senecioylamino-5α-pregn-5-en(6)],转筋草碱Q[20α-dimethylamino-16β-hydroxy-3β-senecioylamino-preg-5-ene(7)],转筋草碱R[3β-benzoylamino-4α-hydroxy-5α-pregn(8)],转筋草碱S[(Z)-3β-(dimethylamino)-17(20)-pregnene-5-en-16-one(9)]。其中孕甾烷生物碱20位取代的3′-不饱和异戊酰胺基团的化合物3-6,是首次发现的甾体生物碱特征结构。本文还进一步以人乳腺癌细胞MDA-MB-231趋化迁移筛选方法评价了各生物碱成分的抗肿瘤转移活性。筛选结果表明,生物碱化合物1,5,7,9,12和17和阳性药物LY294002相比,具有较强的抑制乳腺癌细胞趋化迁移的活性,IC50值分别为0.58,0.71,1.38,1.01,1.91和0.31μM。
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