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目的:应用超声波辅助法提取穿山龙总皂苷,结合Box-Behnken响应面法优化穿山龙总皂苷的提取工艺,确定最佳的提取方法。采用阿霉素造MPC-5细胞损伤模型,探讨穿山龙总皂苷对阿霉素诱导的MPC-5细胞损伤的保护作用;明确穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞氧化应激、细胞凋亡的作用机制。方法:1.应用超声波辅助法提取穿山龙总皂苷,考察超声时间、提取温度、乙醇浓度、提取时间等因素对穿山龙总皂苷得率的影响,结合Box-Behnken响应面法优化穿山龙总皂苷提取工艺,确定最佳的提取方法。2.采用AB-8大孔吸附树脂对穿山龙总皂苷进行纯化,以坏血酸作为阳性对照,选择DPPH、ABTS自由基比较皂苷纯化前后的体外抗氧化活性。3.应用MTT法检测细胞活力,验证阿霉素对MPC-5细胞损伤模型的成立,并研究穿山龙总皂苷对MPC-5细胞的保护作用。4.采用western blot等技术研究穿山龙总皂苷对阿霉素诱导的MPC-5细胞产生的氧化应激的保护作用,通过Nrf2信号通路研究穿山龙总皂苷对阿霉素致慢性肾脏病细胞模型氧化应激和细胞凋亡的分子机制。结果:1.超声波辅助法提取穿山龙总皂苷的最佳提取工艺为;乙醇浓度80%、提取时间为80 min、提取温度78℃、超声时间25 min,在此条件下,总皂苷的含量为16.24%,实验数据稳定。2.体外抗氧化活性研究,实验结果表明,穿山龙总皂苷纯化前后对DPPH和ABTS自由基都有一定的清除能力,但清除能力都较VC弱,皂苷纯化后比未纯化的体外抗氧化能力增强;其抗氧化活性随质量浓度的增大呈上升趋势,未纯化的皂苷、纯化后的皂苷对DPPH自由基的清除力IC50值分别为4.9 mg/ml、3.8 mg/ml,对ABTS自由基的清除能力IC50值分别为2.8 mg/ml、2.2 mg/ml。穿山龙总皂苷具有抑制自由基生成的作用。3.从氧化应激的角度来研究穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤模型的保护作用。应用MTT法来检测MPC-5细胞活力,实验结果发现阿霉素0.25μg/ml时可以造成足细胞50-60%的损伤,导致细胞活力下降,当穿山龙总皂苷浓度为0-20μg/ml时能够减轻阿霉素诱导MPC-5细胞损伤,对细胞起到保护作用。通过氧化应激的相关指标测定,发现阿霉素能够增加细胞内MDA和ROS水平,减少SOD和GSH-Px活力,从而增加细胞凋亡,使细胞发生氧化应激。本次实验实验选用穿山龙总皂苷浓度分别为5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml来研究对MPC-5细胞氧化应激的保护作用,研究发现穿山龙总皂苷能够降低MPC-5细胞内MDA和ROS水平,增加SOD和GSH-Px活力,减少细胞凋亡率,进而抑制阿霉素诱导MPC-5细胞产生的氧化应激水平,并且还发现是具有剂量依赖性。通过分析细胞中相关蛋白的表达情况,结果发现,阿霉素处理MPC-5细胞后,细胞核、总蛋白中Nrf2的表达明显增加,细胞浆中表达量减少,总蛋白中Bax的表达增加,Bcl-2表达明显减少;与模型组相比,阳性对照组和穿山龙总皂苷给药组中细胞浆Nrf2表达减少,细胞核、总蛋白的Nrf2的表达量明显增加,总蛋白中Bax表达显著减少,Bcl-2表达显著增加,但是穿山龙总皂苷效果显著弱于阳性药地塞米松组。通过文章分析讨论,得出阿霉素导致细胞产生氧化应激反应,使Nrf2活化从而起到保护细胞的作用,穿山龙总皂苷能够激活Nrf2氧化应激通路,诱导保护细胞和基因转录,降低MPC-5细胞内MDA和ROS水平,增加SOD和GSH-Px水平,减少细胞凋亡,降低MPC-5细胞的氧化应激反应,进而起到保护阿霉素诱导的MPC-5细胞的氧化应激损伤,通过设定浓度梯度发现,呈现出一定的剂量依赖性,当穿山龙总皂苷浓度为15μg/ml时,保护MPC-5细胞作用最强。结论:（1）穿山龙总皂苷最佳的提取工艺:乙醇浓度80%、提取时间为80 min、提取温度78℃、超声时间25 min,在此条件下,总皂苷的含量为16.24%。并且穿山龙总皂苷对DPPH和ABTS自由基都有一定的清除能力。（2）穿山龙总皂苷对阿霉素诱导的MPC-5细胞产生的氧化应激有保护作用,其作用机理与调控Nrf2信号通路密切相关。