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目的探讨JNK通路相关凋亡因子在MPP+诱导的SH-SY5Y细胞多巴胺能神经元凋亡过程中所起的作用;了解NBP通过调节JNK通路中相关凋亡因子P-JNK、Fas和Fas L对PD细胞模型的保护作用。方法选用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株接种于细胞培养瓶中进行体外培养,采用DMEM/F12=1:1的培养基进行培养,培养基中含有10%胎牛血清,青霉素100U/m L,链霉素100U/m L,实验分为四组:空白对照组、MPP+模型组、丁苯酞+MPP+组、JNK抑制剂SP600125+MPP+组。空白对照组:SH-SY5Y细胞用全培养基正常培养,培养的整个过程不加任何药物进行干预;MPP+模型组:在培养的细胞中加入1mmol/LMPP+培养24h;丁苯酞+MPP+组:在培养的细胞中加入10μmol/L丁苯酞预处理3h后加入1mmol/LMPP+继续培养24h;SP600125+MPP+组:在培养的细胞中加入10μmol/L的JNK抑制剂SP600125预处理3h后加入1mmol/LMPP+继续培养24h。1各组细胞形态利用倒置荧光显微镜观察;2各组细胞的存活率通过MTT比色法进行检测;3各组细胞的凋亡率通过Annexin-V/PI流式细胞术进行检测;4各组细胞P-JNK、Fas和Fas L蛋白表达量采用免疫印迹法(western-blot)检测;5各组细胞Fas和Fas L的基因m RNA采用RT-PCR检测。结果1倒置荧光显微镜下观察各组细胞形态可见:空白对照组贴壁细胞数量多,形态大致为梭形,细胞之间的突起结构明显;MPP+模型组贴壁细胞数量明显减少,细胞形态由长梭形变圆,细胞之间的突起结构变短;给予丁苯酞预处理和JNK抑制剂SP600125预处理的细胞的贴壁数量较MPP+模型组明显增加,变圆的细胞数量较少,大部分的细胞形态是梭形或三角形,与空白对照组的细胞形态接近。2 MTT比色法检测各组细胞相对存活率的结果为:设定空白对照组存活率为100%±0.00%,MPP+模型组细胞的相对存活率为49.3%±2.07%,与空白对照组细胞存活率相比,MPP+组细胞存活率显著降低(P<0.05);给予丁苯酞预处理和JNK抑制剂SP600125预处理的细胞存活率分别为71.9%±2.10%和76.4%±2.80%,与MPP+模型组相比细胞存活率升高(P<0.05)。3流式细胞术检测各组细胞凋亡情况结果为:空白对照组细胞凋亡率为10.63%±2.07%,MPP+模型组细胞凋亡率为32.27%±2.26%,与空白对照组细胞凋亡率相比,MPP+模型组细胞凋亡率显著提高(P<0.05);给予丁苯酞预处理和JNK抑制剂SP600125预处理的细胞凋亡率分别为21.13%±3.63%和19.15%±2.63%,两个预处理组与MPP+模型组的凋亡率相比均明显降低(P<0.05)。4 Western-blot检测P-JNK、Fas和Fas L蛋白的表达结果为:与空白对照组相比,MPP+模型组三种因子蛋白明显增加(P<0.05),给予丁苯酞和JNK抑制剂SP600125预处理后,三种凋亡因子蛋白表达均降低(P<0.05);空白对照组、MPP+模型组、丁苯酞+MPP+组、JNK抑制剂SP600125+MPP+组四组细胞P-JNK蛋白相对表达量为:0.38±0.04、0.94±0.09、0.52±0.09、0.48±0.12;Fas蛋白相对表达量为:0.48±0.09、0.93±0.08、0.61±0.10、0.61±0.12;Fas L蛋白相对表达量为:0.22±0.03、0.52±0.06、0.36±0.07、0.34±0.04。5 RT-PCR检测Fas和Fas L基因m RNA表达结果为:与空白对照组相比,MPP+模型组两种因子m RNA表达明显增加(P<0.05),给予丁苯酞和JNK抑制剂SP600125预处理后,两种因子m RNA表达均降低(P<0.05);空白对照组、MPP+模型组、丁苯酞+MPP+组、JNK抑制剂SP600125+MPP+组四组细胞Fas基因m RNA相对表达量为:0.09±0.04、0.73±0.09、0.42±0.08、0.25±0.08;Fas L基因m RNA相对表达量为:0.16±0.06、0.94±0.18、0.53±0.08、0.32±0.08。结论1 JNK通路上的相关凋亡因子P-JNK、Fas和Fas L在介导SH-SY5Y细胞PD细胞模型多巴胺能神经元凋亡过程中起调控作用,给予JNK抑制剂SP600125后三种因子表达降低,抑制细胞凋亡;2 NBP可以降低JNK通路相关因子PJNK、Fas和Fas L的表达,是NBP降低凋亡的作用靶点。