【摘 要】
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本研究应用Red重组工程技术将耶尔森氏菌（Yersinia seudotuberculosis）inv基因、李斯特菌（Listeria monocytogenes）hly基因、南美锥虫（trypanosome cruzi）P4基因敲入大肠杆菌染色体
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本研究应用Red重组工程技术将耶尔森氏菌（Yersinia seudotuberculosis）inv基因、李斯特菌（Listeria monocytogenes）hly基因、南美锥虫（trypanosome cruzi）P4基因敲入大肠杆菌染色体中，并将大肠杆菌染色体asd基因进行缺失，构建出四株细胞壁合成营养缺陷型侵袭性E.coli DH10B：DH10B pGB2Ωinv-hly Δasd、DH10B lacZ（?）hly lacA<>inv Δasd、DH10B lacZ（?）hly lacA<>inv192AA Δasd、DH10B lacZ（?）hly lamb∷P4Δasd。体外侵袭实验表明带有inv全长基因的重组菌具有一定侵袭哺乳动物细胞的能力。之后，将霍乱毒素B亚单位（CTB）基因替换重组菌DH10B lacZ（?）hly lacA<>inv Δasd染色体lac操纵子中lacY基因，以4×108cfu剂量口服免疫BALB／c小鼠，ELISA检测结果表明部分小鼠产生了CTB的特异性抗体IgG。为进一步建立以大肠杆菌DH10B作为DNA疫苗或基因治疗的载体奠定了基础。
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