【摘 要】
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研究目的:构建人源性抗CEA噬菌体抗体库(Fab),筛选该库可以得到小分子量(相对于完整抗体),穿透力强,无人抗鼠抗体反应(HAMA)的人源性抗CEA抗体,为制备治疗高表达CEA肿瘤的免
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研究目的:构建人源性抗CEA噬菌体抗体库(Fab),筛选该库可以得到小分子量(相对于完整抗体),穿透力强,无人抗鼠抗体反应(HAMA)的人源性抗CEA抗体,为制备治疗高表达CEA肿瘤的免疫导向药物奠定基础.研究方法:采用噬菌体表面展示和基因工程抗体技术,从5例高表达CEA结、直肠癌患者的肠系膜中提取淋巴结.用Trizol试剂提取淋巴细胞中的总RNA,以Olig(dT)为引物逆转录扩增出cDNA,再以4对人免疫球蛋白lgG重链和轻链的简并引物,扩增出重链Fd基因和轻链κ链基因.经琼脂糖凝胶电泳分离目的条带,再用纯化试剂盒从凝胶中提取和纯化DNA,分别用SacI和XbaI限制性内切酶消化κ链基因,重组到噬菌粒载体p3MH中,电穿孔转化大肠杆菌XL1-Blue构建κ轻链库.测定轻链库的库容和重组率.再提取轻链库噬菌粒p3MH-κ,分别用XhoI和SpeI限制性内切酶消化Fd基因和p3MH-κ基因,重组成p3MH-κ-Fd,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建Fab库.测定Fab库的库容容和重组率.研究结果:构建了κ轻链库,库容为1.9×10<7>克隆水平,经菌落PCR鉴定,其重组率为80％.构建了人源性抗CEA噬菌体抗体库(Fab),测定库容为1.8×10<7>;经菌落PCR鉴定,κ重组率为70％,Fd重组率为60％;经SacI和SpeI双酶切鉴定,Fab重组率为50％.研究结论:该实验成功地构建了人源性抗CEA噬菌体抗体库(Fab).
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