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三颗针是广泛使用的中药、民族药,收载于1977年版和2010年版《中国药典》及部分省级地方中药材标准中,《中国药典》规定其来源为小檗属(Berberis)数种植物的干燥根。小檗属植物分布很广,我国约有250种,其中《湖北植物志》收载24种,2变种。目前国内关于小檗属药用植物的研究以来源于甘肃、贵州、新疆、西藏等地的植物种为主,湖北产该属药用植物的研究较少。同时,我们在市场调查中发现,三颗针商品中同时混有大量的地上茎。因此笔者对采自湖北的5种小檗属植物(拟豪猪刺、川鄂小檗、芒齿小檗、湖北小檗和汉源小檗)根进行了性状、显微鉴别研究,对根及非药用部位茎进行了薄层色谱研究,测定了根及茎中药效物质总生物碱及小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀和异紫堇定碱的含量,比较研究了不同来源药材(包括地上茎)的指纹特征和抗菌活性,以期为三颗针药材的鉴定、质量评价及资源的深入研究与开发奠定有关基础。 显微特征研究结果显示,5种小檗属植物根横切面有很多显著的共性显微特征,如皮层和韧皮部有绿黄色的纤维(群)和石细胞(群);韧皮射线中有大量草酸钙方晶,有时还有石细胞(群)和纤维(群)。但在木栓层细胞的列数、石细胞和纤维的多少以及石细胞形态和纤维的排列、韧皮射线形状及内含方晶多少、木质部导管的排列及数目等方面有明显差异,故利用显微特征能达到鉴别的目的。 薄层色谱研究中,5种小檗属植物根在本实验条件下均有6个相对应的荧光斑点,它们仅在大小和颜色深浅上有所差异,说明小檗属多种植物的根均作三颗针药用具有非常一致的药效物质基础,尤其是均含有主成分小檗碱与药根碱。同种植物的茎也均有小檗碱与药根碱主斑点,其余斑点也绝大部分与其根对应,说明5种植物的茎与根的化学组成也基本一致。 分别通过酸性染料比色法和高效液相色谱法对5种小檗属植物根(及茎)进行总生物碱和生物碱类成分小檗碱的含量测定研究。结果表明,拟豪猪刺、湖北小檗和汉源小檗根中总生物碱及小檗碱的含量较高;3种植物茎的总生物碱含量也较高,接近或约占根的2/3。另外,川鄂小檗、湖北小檗、汉源小檗茎中小檗碱含量均大于0.6%,达到了2010版《中国药典》对该药材根的相关含量指标的规定。 研究获得了5种小檗属植物根(以及茎)指纹特征分析方法及同时测定其中5种生物碱类成分的HPLC方法。结果表明,5种植物根样品在本HPLC实验条件下共有9个峰,其中6个为共有峰,说明其化学成分具有很大的相似性;拟豪猪刺、湖北小檗、汉源小檗根中的小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀和异紫堇定碱等5个主要成分的含量较高。5种植物茎含有5个与其根相对应的色谱峰,拟豪猪刺、汉源小檗和湖北小檗茎中几种主要生物碱成分的含量较高,说明茎与根有相似的药效物质基础。 以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性菌大肠埃希菌,真菌白色念珠菌为实验菌株,研究了5种小檗属植物根(包括茎)水提液的抑菌活性。结果显示,5种植物根的水提物对3种菌均有显著的抑制作用,湖北小檗、汉源小檗和拟豪猪刺抑菌作用最强;湖北小檗和川鄂小檗茎的水提物对3种菌均有明显的抑制作用,汉源小檗茎对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有抑制作用,拟豪猪刺和芒齿小檗茎对白色念珠菌有明显的抑制作用。 综合以上研究结果可知,5种小檗属植物根的化学组成、主要生物碱成分含量及抑菌活性有很大的相似性,说明《中国药典》对三颗针基源的规定具有合理性。拟豪猪刺、湖北小檗、汉源小檗根中总生物碱及5种主要生物碱成分的含量较高,抑菌作用较强,推测此3种植物为优质的三颗针药材来源。湖北小檗、汉源小檗、川鄂小檗茎中也含有较多的生物碱成分,有较好的抑菌效果,说明该3种植物的茎作为药用资源有深入研究的价值。 本研究首次从鉴定、HPLC指纹特征、有效成分含量和药理活性等方面分析比较了采自湖北省的5种小檗属植物根(包括茎)的品质,为多基源药材三颗针的鉴定、质量评价、临床应用提供了重要的实验依据,为湖北省相关小檗属植物资源的开发和合理利用奠定了基础。