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胰蛋白酶(Trypsin)是动物消化道中一种主要的碱性蛋白水解酶，属于丝氨酸蛋白酶家族，专一性水解赖氨酸或精氨酸羧基形成的肽键。其主要功能一是消化蛋白质食物，二是激活所有胰腺分泌的酶原，它可以有力迅速地激活其他蛋白酶原(糜蛋白酶原、羧肽酶原、弹性蛋白酶原)而行使消化功能。在脊椎动物中，由胰脏的腺泡细胞的核糖体产生无活性的前体——胰蛋白酶原(Trypsinogen)再进入胰腺运输管，最后释放到肠腔，在那里被肠黏膜细胞分泌的肠激酶活化而生成有活性的胰蛋白酶。通过比较不同动物编码胰蛋白酶的mRNA序列，可以了解其胰蛋白酶的结构特点以及与功能之间的关系，进而揭示不同动物对蛋白质消化能力差异的原因。本研究对中华倒刺鱼巴胰蛋白酶原mRNA进行了克隆和序列测定，并对其核苷酸序列及推导氨基酸序列以及预测的蛋白质高级结构进行了分析，主要研究结构如下： 1 中华倒刺鲃胰蛋白酶基因的全长cDNA序列 在对多种硬骨鱼类的胰蛋白酶基因进行了多重比对后设计了2个特异性3′RACE引物，以来自中华倒刺鲃胰腺的mRNA为模板扩增得到了中华倒刺鱼巴胰蛋白酶的3′端序列。根据得到的3′端序列设计了一个用于扩增胰蛋白酶基因的中间片段的下游引物，又根据斑马鱼的胰蛋白酶基因序列设计了一个上游引物，从而得到了中华倒刺鲃胰蛋白酶的中间片段序列。再根据得到的中间片段序列设计了两组5′RACE特异性引物，从而得到了中华倒刺鲃胰蛋白酶的5′段序列。 对所得到的三段序列进行拼接，得到了中华倒刺鲃胰蛋白酶的cDNA序列，它全长850bp，5′非编码区为29bp，编码区包括738个核苷酸，编码一个长246个氨基酸残基的蛋白质前体，3′非编码区为80bp。 2 中华倒刺鲃胰蛋白酶基因推导氨基酸序列的分析 克隆得到的中华倒刺鲃胰蛋白酶的cDNA全长850bp，包括一个5′非编码物、一个编码246个氨基酸的开放阅读框、TAA终止密码子和一个包括加尾信号和poly(A)尾的3′非编