丙酸睾酮抑制兔泪腺上皮细胞凋亡及其机理的研究

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目的:利用体外培养的兔泪腺上皮细胞为模型,观察丙酸睾酮对过氧化氢作用的泪腺上皮细胞活性、凋亡的干预作用以及对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的调节作用,以进一步阐明雄激素抑制泪腺上皮细胞凋亡的机理,为干眼症的性激素防治提供科学的依据。 方法:1. 兔泪腺上皮细胞的分离:采用改进酶消化法。 2. 丙酸睾酮对过氧化氢作用的泪腺上皮细胞活性和凋亡的作用:不同剂量丙酸睾酮(1×10-8mol/l、1×10-7mol/l、1×10-6mol/l、1×10-5mol/l)作用24小时以及过氧化氢作用60分钟后,采用MTT法检测细胞活性和TUNEL法检测细胞凋亡。3. 丙酸睾酮对泪腺上皮细胞Bax和Bcl-2表达的影响:泪腺上皮细胞经不同剂量丙酸睾酮(1×10-8mol/l、1×10-7mol/l、1×10-6mol/l、1×10-5mol/l)作用24小时以及过氧化氢作用60分钟后,用免疫细胞化学法检测Bax和Bcl-2的表达水平。结果:兔泪腺上皮细胞的得率为6-8×106/泪腺,纯度为90%以上,存 <WP=7>活率为96%以上。2. MTT法和TUNEL法检测结果表明,与B组相比较,不同剂量丙酸睾酮(1×10-8mol/l—1×10-5mol/l)均能明显抑制泪腺上皮细胞的凋亡和明显增加泪腺上皮细胞的活性,并呈剂量依赖性。3. 免疫细胞化学结果表明:与B组相比较,过氧化氢诱导凋亡的泪腺上皮细胞经不同剂量丙酸睾酮(1×10-8mol/l—1×10-5mol/l)作用后Bax蛋白表达明显减弱,Bcl-2 蛋白表达明显增强,并呈剂量依赖性。结论:1.改进的酶消化法成功的分离和培养了兔泪腺上皮细胞。2.丙酸睾酮可以抑制过氧化氢诱导的泪腺上皮细胞的凋亡。3.丙酸睾酮抑制泪腺上皮细胞凋亡的机制可能与凋亡调节相关基因Bcl-2表达的上调和Bax表达的下调有关。
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