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富含半胱氨酸型运动神经元蛋白1(CRIM1)是一类富含半胱氨酸的跨膜蛋白,该蛋白是新发现的拮抗BMPs蛋白家族的一个成员,早前对于CRIM1的研究主要是在于胚胎和器官发育以及肾纤维化疾病当中。基于其早前报道的功能,我们推测该蛋白可能在癌细胞的粘附和迁移行为当中有着重要的作用,并可能进一步影响到癌细胞的表皮间质转化行为。本文的主要研究内容:检测在不同转染条件下si RNA转染后的沉默效率,通过q PCR,westernblot检测CRIM1的基因和蛋白的表达量,进而筛选出最适si RNA转染条件。结果显示,在转染后48h,转染试剂与si RNA体积比在1:1的情况下,A549中CRIM1的表达水平下调达到最佳。通过si RNA转染抑制CRIM1表达表达和加入CRIM1多肽诱导处理两种方式对A549细胞进行处理,用MTT法分析CRIM1对A549细胞增殖能力的影响,结果显示CRIM1对A549细胞增殖能力无明显影响;通过伤痕愈合法分析CRIM1对A549细胞迁移能力的影响,结果显示CRIM1对A549细胞迁移能力为正调控;通过粘附分析法分析CRIM1对A549细胞粘附能力的影响,结果显示CRIM1对A549细胞粘附能力为正调控。得出结论:CRIM1对A549细胞的迁移和粘附呈正调控,而对其增殖无显著影响。鉴于CRIM1可以影响细胞的粘附和迁移行为,因此我们怀疑该蛋白参与细胞EMT。先用TGFβ1诱导A549细胞发生EMT后,通过进一步实验分析CRIM1是否参与到A549细胞EMT的过程当中。结果显示CRIM1在EMT过程中呈现蛋白上调,但CRIM1多肽诱导并不能使细胞发生EMT。此外,CRIM1的加入也无法诱导和逆转EMT的发生。CRIM1沉默后蛋白表达结果显示CRIM1的沉默可以使N-CAD,E-CAD的蛋白表上调。得出结论:CRIM1不能直接诱导细胞发生EMT,它可能并不直接参与到EMT的过程当中,但是CRIM1的沉默对于N-CAD,E-CAD蛋白的表达有影响。我们构建了原癌基因YAP1真核表达质粒pc DNA3.1(+)-EGFP-YAP1,并将其转染到A549细胞以过表达Hippo信号通路关键因子YAP1,研究CRIM1基因与Hippo信号通路之间的关系。检测结果显示我们成功地在A549中过表达了YAP1基因,并检测到了细胞中CRIM1表达的显著上调。得出结论:CRIM1的表达受到Hippo信号通路的调控。