头穴透刺调节Rho/ROCK通路及保护脑出血大鼠血管内皮细胞的实验研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:FRESH_STAR
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目的:  通过百会-太阳穴透刺对脑出血大鼠Rho/ROCK信号通路及血管内皮细胞影响的研究,探讨头穴透刺治疗脑出血的机制。  方法:  雄性健康Wistar大鼠240只,体重280-300g,采用随机数字表法随机分为盐水组、模型组、针刺组三个组,每组又分为6h、24h、3d,7d四个时点。采用改良的自体血注入法制备脑出血模型,针刺组造模成功后lh,给予“百会”透“太阳”穴电针处理治疗(连续波,频率2Hz,电流1mA),电针30min,1次/d,连续观察脑出血后6h、24h、3d、7d时神经行为学评分,应用干湿重法检测脑组织含水量,伊文氏蓝检测血脑屏障通透性,HE染色观察脑出血后血肿周围的病理变化,免疫组化和Western blot法检测claudin-5、occludin、ZO-1、RhoA、ROCK2、MLC1蛋白表达及RT-PCR法检测相关基因表达。  结果:  1.针刺对脑出血大鼠神经功能的影响:盐水组大鼠未出现明显的神经功能障碍。造模成功后大鼠表现为精神萎靡,反应迟钝;造模后大鼠左侧前肢向腹下屈曲、回收,右侧前肢朝地面伸展;向左侧推大鼠时,阻力右侧较明显升高;大鼠有向左侧旋转的行为出现。自6h开始至3d模型组神经功能缺损程度呈进展性加重,3d时达高峰,3d后大鼠神经功能逐渐恢复。各时点模型组与盐水组比较,模型组大鼠神经功能评分均高于盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);各时点针刺组与模型组比较,针刺组大鼠神经功能评分均低于同时点模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。表明针刺对脑出血大鼠神经功能缺损具有改善作用。2.针刺对脑含水量的影响:模型组大鼠6h后脑水含量增多,24h持续加重,3d时达峰值,3d后逐渐减少。各时点模型组与盐水组比较,模型组脑含水量均高于盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);各时点针刺组与模型组比较,针刺组脑含水量均低于同时点模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。表明针刺可以减轻脑含水量。3.针刺对血脑屏障保护的影响:模型组大鼠6h后EB含量升高,3d时达峰值,3d后逐渐下降。各时点模型组与盐水组比较,模型组EB含量均显著高于盐水组,差异有统计学意义(P<0.05):各时点针刺组与模型组比较,针刺组EB含量均低于同时点模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。表明针刺可以降低脑出血后EB含量,保护血脑屏障。4.病理形态学观察结果:HE染色示,盐水组可见正常染色的脑组织,细胞形态清晰、结构完整,细胞数目无减少,未见核固缩,炎性细胞浸润。模型组大鼠脑出血6h后,血肿周围脑组织细胞排列疏松,组织结构不清,血管、细胞周围出现间隙,脑神经细胞轻微肿胀;脑出血后24h,出血部位神经细胞、胶质细胞大量坏死、消失,部分神经细胞固缩,胶质细胞肿胀,炎性细胞浸润;脑出血后3d,血肿周围脑组织损伤较重,可见大片明显出血灶,血肿周围脑组织间隙明显增大,神经细胞肿胀严重,核固缩、深染,神经细胞坏死、消失,大量炎症细胞浸润;7d时脑出血病灶变小,脑组织细胞排列紧密,可见增生的毛细血管和胶质细胞,病灶周围可见凋亡细胞,偶有炎性细胞。针刺组大鼠脑组织病理损伤均较模型组有不同程度的改善,病灶变小,与周边脑组织界限清楚,血肿周围细胞间隙减小,神经细胞数目减少,少量神经细胞固缩、深染,可见增生胶质细胞。5.针刺对血管内皮claudin-5、occludin、ZO-1蛋白及其基因表达的影响:各时点模型组与盐水组比较,模型组claudin-5、occludin、ZO-1阳性细胞数少于盐水组,claudin-5、occludin、ZO-1蛋白及基因含量均低于盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05);各时点针刺组与模型组比较,针刺组claudin-5、occludin、ZO-1阳性细胞数多于模型组,claudin-5、occludin、ZO-1蛋白及基因含量均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),表明针刺可以保护血管内皮细胞功能。6.针刺对RhoA、ROCK2、MLC1蛋白及其基因表达的影响:各时点模型组与盐水组比较,模型组RhoA、ROCK2阳性细胞数多于盐水组,RhoA、ROCK2、MLC1蛋白及基因含量高于盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);各时点针刺组与模型组比较,针刺组RhoA、ROCK2阳性细胞数少于模型组,RhoA、ROCK2、MLC1蛋白及基因含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),表明针刺可以抑制Rho/ROCK通路的激活。  结论:  1.头穴透刺对脑出血大鼠神经功能缺损具有改善作用。2.头穴透刺能够减轻脑出血后脑水肿程度。3.头穴透刺能够降低脑出血后EB含量,保护血脑屏障。4.脑出血后血管内皮细胞claudin-5、occludin、ZO-1蛋白表达下调,针刺可以上调claudin-5、occludin、ZO-1蛋白及其基因表达,保护血管内皮细胞功能。5.脑出血后Rho/ROCK通路激活,针刺可以下调RhoA、ROCK2、MLC1蛋白及其基因表达,抑制Rho/ROCK通路的激活。6.头穴透刺调节脑出血大鼠Rho/ROCK通路、保护血管内皮细胞功能是头穴透刺治疗脑出血的作用机制。
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