论文部分内容阅读
以标准的糖尿病大鼠为模型,探索同种异体的SD大鼠胰岛联合骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Cells,BMSCs)能否提高治疗糖尿病的远期疗效,为临床开展胰岛联合BMSCs移植治疗糖尿病的提供实验依据,并观察同种异体大鼠联合BMSCs移植后细胞在体内的分布、归巢情况,为临床细胞移植后细胞的定植、归巢提供理论依据。链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)构建大鼠糖尿病模型;贴壁法分离、培养BMSCs,免疫荧光法和流式细胞鉴定BMSCs的表面抗原(CD44、CD34、CD90、CD45、CD29);胶原酶法分离大鼠胰岛,双硫腙法(Dithizone,DTZ)鉴定胰岛细胞;将细胞分为对照组;BMSCs培养组;单独胰岛组;胰岛与BMSCs共培养组,于培养后的第1、3、7天取其上清液进行ELISA法检测各组的胰岛素与C-肽的分泌;18F-FDG体外标记胰岛与BMSCs,随机将糖尿病大鼠分成:对照(n=15)、单独胰岛移植组(n=15)、单独BMSCs移植组(n=15)、胰岛与BMSCs联合移植(n=15),经门静脉移植分别移植(对照组0.2ml生理盐水;胰岛组0.2ml胰岛500IEQ/100g;干细胞组0.2ml的3*10^5/100g个BMSCs;联合组0.1ml胰岛500IEQ/100g+0.1ml 3*10^5/100g个BMSCs)。移植后的第1、3、7、14、30天每组每次均随机处死3只大鼠,取肝脏、血液,ELISA测量移植后各组大鼠血清的胰岛素与C-肽的含量及检测大鼠的血清的肝功能,免疫荧光法了解肝组织内胰岛素的表达情况,HE检测肝脏的病理情况,PET-CT示踪移植入体内的细胞分布情况。经STZ法诱导糖尿病大鼠期间有95%的大鼠血糖浓度在一周内有3天连续高于16.8mmol/L的,伴随体重下降,总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶均升高;经全贴壁法培养的BMSCs大多是呈长梭形生长,免疫荧光法的检测结果显示BMSCs为CD44阳性,CD34阴性,流式细胞仪测量结果表明BMSCs是高表达CD90、CD29,低表达CD45的;胶原酶法能够很有效的分离出胰岛细胞,且被DTZ染成猩红色的就是胰岛细胞,未被染成猩红色的就是外分泌腺;体外共培养中的胰岛形态与单独胰岛的形态相比保存的更好,存活的时间也更长,胰岛素与C-肽的分泌也较单独胰岛的高;移植后联合组的血糖在正常血糖内波动一个月,单独胰岛组的血糖水平只能在正常血糖范围波动3天,单独BMSCs组、对照组的大鼠在移植后的血糖水平未明显降低。联合组在移植后的第1、7、14、21、30天的血糖明显低于单独胰岛组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组比胰岛组能有效的修复肝脏的功能;联合组的胰岛素与C-肽的分泌也比单独胰岛组高;联合组和单独胰岛组的炎细胞侵润都不明显。PET-CT结果显示,BMSCs主要均匀分布在肝脏的右肝,胰岛主要聚集在肝门静脉末端分支,且BMSCs围绕在胰岛的周围,对照组的肝脏无明显的显影。同种异体的胰岛联合BMSCs治疗大鼠糖尿病的效果优于单独胰岛移植。PET-CT能直观的揭示胰岛与BMSCs经门静脉移植入后在肝内的分布。